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用 Retsch MM301基因组DNA快速提取

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内容节点
概述
实验/设备条件
样品提取
实验/操作方法
实验结果/结论
仪器/耗材清单
实验 时 对 所有材料的DNA提取均采用同一方法,即CTAB法,且这些材料的DNA提取都
使用RETSCH MM301 DNA提取仪在同一时间(同一工作日)内完成,以尽量缩小材料间DNA
提取的浓度差异
CT A B法 快速提取植物基因组DNA的操作步骤如下:
A. 2 m1 离心管中加入1cm }新鲜叶片2片;
B. 加 入 CTAB缓冲液500u1,研磨机(RETSCH MM 301)研磨成匀浆;
C. 65 水浴1小时;
D. 置 于4冰箱冷却至150C以下;
E. 加 入 250ul 24:1 氯仿/异戊醉,上下混匀5分钟,保证样品与氯仿充分混匀;
F. 1 30 00rpm离心10分钟:
G. 取 上 清液200ul,加入预先加好200ul异丙醇的1.5m l离心管中,轻轻上下颠倒混匀:
H. 4 0C 冰箱静置30分钟以上;
I. 1 30 0Drpm离心10分钟,弃上清液,凉干;
7 加 入100u1Hz0(含luIRNase)溶解DNA;
K. 37 水浴30分钟去除RNA;
L 用 1 %琼脂糖凝胶电泳检测DNA浓度及质量;
M. 稀 释 DNA至所需浓度(约60ng/ul)后于一20冰箱中保存待用 德国Retsch(莱驰)MM400冷冻混合研磨仪
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