凯氏法测定非蛋白质氮的测定

内容节点: 概述; 实验/设备条件; 样品提取; 实验/操作方法; 实验结果/结论; 仪器/耗材清单

因为蛋白质中的含氮量相当恒定（约14%一18%），平均含量约为16%因此，凯氏法测定蛋白质氮乘以6.25%即为蛋白质含量 用以下方法直接测定（凯氏法） 测定的流程是，称取0.2-0.5g风干的植物材料，放入100ml烧杯中，加入50ml水，煮沸5min，在40-50下保温30min徐徐加入10ml6%硫酸铜，摇匀，静置lh（或过夜）过滤，残渣按凯氏定氮法将残渣消化，蒸馏，测定收集液中氨，计算得出含氮量非蛋白质氮包括溶于水的氮化物，如氨基酸酸性氮和有机含氮碱等 非蛋白质氮总量=总氮蛋白质氮计算得出 也可以按下法测定，即：称取0.2-0.5g植物样品，放入研钵中加2ml水，研磨成匀浆态加入3ml3%硫酸铜溶液，摇匀，匀浆转移到离心管内，同时以8ml水冲洗净残渣 离心管放入沸水中，用玻璃棒搅拌3min取出加入3ml0.2mol/L的NaOH，搅匀，静放10min，离心将溶液放入100ml凯氏瓶中，用热水冲洗沉淀2次，每次用10ml，每次冲洗时要向冲洗的水中加人l滴3%的硫酸铜溶液 然后向凯氏瓶的浸出物中加入2ml浓硫酸，O.3m110%钼酸钠（10gNa2MoO4·2H2O溶解于100m1水中，加入0.5ml2mol/LNaOH，加热至沸，并煮沸15min，冷却后补充无氨水100ml），4滴3%过氧化氢放在电炉上蒸发，直至出现泡沫，然后降低温度以免泡沫溅到瓶颈上继续用微火加热直至硫酸出现白色蒸汽 之后用球形玻璃塞塞上凯氏瓶口，增强火力，消化到溶液透明为止冷却后向瓶中残留物加入10ml水溶液转人50ml容量瓶中，用水冲洗残渣，并补加水到50ml，混匀取25ml溶液放人烧杯中滴定加1滴0.1%甲基橙溶液，冷却后，以2mol/LNaOH溶液滴定，直到指示剂呈现黄色为止，不能滴定过头然后加10ml含有溴酸钾的pH6.7的磷酸缓冲液和5ml0.12mol/L氯氨溶液（15g氯氨溶于水中，用水稀释到1L，混匀，用棉花过滤后，装入暗色瓶中），即用玻璃盖盖住烧杯，以圆周运动方式将溶液混匀，并静置25min，其后加入2ml2%碘酸钾溶液，10m18%草酸溶液 在有淀粉指示剂存在下，用0.02mol/L硫代硫酸钠溶液滴定释放出来的的碘1ml0.02mol二硫代硫酸钠相当于0.09338mg氮另按此法设不加样品的对照，操作步骤完全与上相同 Z后按下面公式计算样品中的非蛋白氮含量 X（非蛋白氮含量%）=[0.4667×50×K×（6z-6）1/（25×7n）=[0.9338×K×（a-b）]/72 式中： 50为试液体积（ml）； 25为用氯氨法测定时所取试液的体积（ml）； a为滴定对照所用去的0.02mol二硫代硫酸钠体积（ml）； b为滴定试液所用去的0.02mol/L硫代硫酸钠体积（ml）； K为硫代硫酸钠溶液的滴定度372为分析的样品重沛欧SKD100凯氏定氮仪蛋白质测定仪沛欧SKD-600定氮仪--蛋白质测定仪