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紫外检测器在液相色谱仪检测中的应用

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概述
实验/设备条件
样品提取
实验/操作方法
实验结果/结论
仪器/耗材清单
紫外检测器是液相色谱仪中应用Z广泛的检测器,当检测波长范围包括可见光时,又称为紫外-可见检测器紫外吸收检测器不仅灵敏度高噪音低线性范围宽有较好的选择性,而且对环境温度流动相组成变化和流速波动不太敏感,因此可用于对光吸收小消光系数低的物质进行微量分析既可用于等度洗脱,也可用于梯度洗脱紫外检测器对流速和温度均不敏感,可于制备色谱其中要注意流动相中各种溶剂的紫外吸收截止波长,如果溶剂中含有吸光杂质,则会提高背景噪音,降低灵敏度此外,梯度洗脱时,还会产生漂移
紫外检测器的工作原理是:当一束单色光透过流动池时,若流动相不吸收光,则吸收度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比可用公式表示为:A=lg=lg=ECL(式中I0为入射光强度,I为透射光强度,T为透光率,E为吸收系数)其依据是光吸收定律,从光源发出的光经狭缝滤光片样品池到光电培增管上,使束由于样品浓度不同所引起光强的变化转换成光电流的变化,此光电流经放大器输入到对数转换器,使透光率T转成A输出根据上式就知测出了A,就知样品浓度C若从放大器直接输入记录仪,绘出的是样品透光率T变化的图谱,若从对数转换器输入到记录仪绘出的是样品光密度A变化的图谱
紫外检测器分为固定波长检测器可变波长检测器和光电二极管阵列检测器按光路系统来分,紫外检测器可分为单光路和双光路两种可变波长检测器又可分单波长(单通道)检测器和双波长(双通道)检测器PDAD是80年代出现的一种光学多通道检测器,它可以对每个洗脱组分进行光谱扫描,经计算机处理后,得到光谱和色谱结合的三维图谱其中吸收光谱用于定性(确证是否是单一纯物质),色谱用于定量常用于复杂样品(如生物样品中草药)的定性定量分析
在使用紫外检测器分析检测注意事项以下以保证检测器的灵敏度
1. 氘灯的光强受温度和电压影响较大,建议在恒温室内工作或者在冰库里工作;
2. T调零生产时机内已校准,当更换光电培增管后,需重新校准;
3. 氘灯寿命可达数千小时,若发现记录仪不能调到10mV,且基线一直往小的方向漂移要考虑换灯如氘灯不亮可再按一次电源开关,氘灯就会即亮,光电培增管寿命在数千小时以上注意开机工作时不得拿出样品池架,以免强光照射光电培增管造成损坏氘灯发光区域和光电培增管光阴极窗口沾污时,可用干净棉芯酒精擦拭干净


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