小鼠17-羟皮质类固醇（17-OHCS）elisa试剂盒使用说明书

内容节点: 概述; 实验/设备条件; 样品提取; 实验/操作方法; 实验结果/结论; 仪器/耗材清单

小鼠17-羟皮质类固醇（17-OHCS）酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中17-羟皮质类固醇（17-OHCS）的含量
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠17-羟皮质类固醇（17-OHCS）水平用纯化的小鼠17-羟皮质类固醇（17-OHCS）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入17-羟皮质类固醇（17-OHCS），再与HRP标记的17-OHCS抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇（17-OHCS）呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠17-羟皮质类固醇（17-OHCS）浓度
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**第二孔中分别加标准品100l，然后在**第二孔中加标准品稀释液50l，混匀；然后从**孔第二孔中各取100l分别加到第三孔和第四孔，再在第三第四孔分别加标准品稀释液50l，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50l弃掉，再各取50l分别加到第五第六孔中，再在第五第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五第六孔中各取50l分别加到第七第八孔中，再在第七第八孔中分别加标准品稀释液50l，混匀后从第七第八孔中分别取50l加到第九第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50l，混匀后从第九第十孔中各取50l弃掉（稀释后各孔加样量都为50l，浓度分别为24g/L，16g/L ，8g/L，4g/L，2g/L）
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）待测样品孔在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40l，然后再加待测样品10l（样品Z终稀释度为5倍）加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀
3. 温育：用封板膜封板后置37温育30分钟
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50l，空白孔除外
7. 温育：操作同3
8. 洗涤：操作同5
9. 显色：每孔先加入显色剂A50l，再加入显色剂B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50l，终止反应（此时蓝色立转黄色）
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）测定应在加终止液后15分钟以内进行