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人多免疫球蛋白受体(poly-IgR)ELISA试剂盒

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概述
实验/设备条件
样品提取
实验/操作方法
实验结果/结论
仪器/耗材清单
elisa试剂盒说明:
基因工程试剂对免疫测定技术发展的影响:
免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料,如抗原抗体,酶等以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原,而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体,而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各总化学合成方法制备近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种新型使用的测定方法也不断出现操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡每次检测都应该做标准曲线如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围
1. 加样:分别设空白孔标准孔待测样品孔空白孔加样品稀释液100l,余孔分别加标准品或待测样品100l,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37反应120分钟
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤每孔加生物素标记抗体工作液 100l(取1l生物素标记抗体加99l生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37,60分钟
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350l/每孔,甩干
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100l,37,60分钟
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350l/每孔,甩干
6. 依序每孔加底物溶液90l,37避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)
7. 依序每孔加终止溶液50l,终止反应(此时蓝色立转黄色)终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值) 在加终止液后15分钟以内进行检测
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