提取
(1) 取4 g样品,加入3至5 mL柠檬酸水溶液*充分混匀,加入8 mL二甲基亚砜和10 mL甲醇,振荡提取10 min;
(2) 加入15 mL甲基叔丁基醚:正己烷=1:1*,振荡提取10 min,6000rpm离心2 min,取出上层清液;
(3) 向残渣中加入10 mL甲基叔丁基醚:正己烷=1:1,按照步骤(2)重复提取一次,合并两次上清液;
(4) 将上清液在35℃条件下减压蒸馏至近干,待净化。 柠檬酸水溶液*:20 g柠檬酸,加入100 mL水溶解; 甲基叔丁基醚:正己烷=1:1* 是体积比。
净化 ProElut VDC 2 g/12 mL(Cat.#65358)
a活 化:依次向柱中加入10 mL乙酸乙酯、10 mL正己烷,弃去流出液;
b上 样:用5 mL正己烷分两次洗涤旋蒸瓶并加入柱中,弃去流出液;
c淋 洗:依次加入10 mL正己烷、10 mL10%乙酸乙酯正己烷,弃去流出液;
d洗 脱:加入20 mL 10%乙酸乙酯正己烷,收集流出液;
e重新溶解:将洗脱液在35 ℃减压蒸馏至近干,用甲醇定容至1 mL,供HPLC分析。
色谱柱:Diamonsil C18(2), 250 mm×4.6 mm, 5 μm(Cat# 99603)
流 速:1.0 mL/min
进样量:20 μL
柱 温:30 ℃
检测器:UV 254 nm
流动相:A:95% 甲醇水溶液 B:甲醇
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