单细胞流式分选指标和注意事项

通过对含有单细胞的液滴进行分离从而实现细胞的分选。有一个超高频的压电晶体配在流动室的喷口，充电后振动，将喷出的液流断裂为均匀的液滴，在这些液滴之中分散着待测细胞。将正、负不同的电荷充入这些液滴，当液滴往带有几千伏的偏转板流经时，高压电场会使充电液滴发生偏转，向着各自的收集容器落入，而中间的废液容器中则落入没有充电的液滴，从而使细胞的分离得以实现。

分选主要主要分为分选得率、分选收获率、分选纯度和分选速度四个指标。

1.分选收获率：

分选收获率是指被分出细胞与原来溶液中该细胞的百分比。一般来说，分选纯度和收获率是成反比的，若纯度降低，那么收获率会提高，若纯度提高，那么收获率会降低。

2.分选得率：

纯度和收获率是指目的细胞的总量从一群体细胞悬液中被分辨出来，再经分选后使目的细胞的实际得率获得。细胞的实际得率和细胞的分选速度有着非常密切的关系。

3.分选速度：

分选速度是指所要细胞每秒能够提取多少个。目前为止，每秒上万个细胞为大型机的Z高分选速度，每秒300个为台式机的分选速度。

4.分选纯度：

分选纯度是指分选出的细胞所占的比例，大约99％的分选纯度台式机和大型机通常都能够达到。

如果想要足够多的符合要求的单细胞通过流式分选出来，那么必须注意以下几点：

1、效率

自动化替代人工使成本得以节约，效率也di一提高。当你需要对超低含量的细胞进行分选时，工程的耗时必定非常长，因此必须考虑鞘液用光时更换繁琐度、耗时、连续性等问题。

2、精度

流式分选的仪器有着超高的精密度，结果的偏差可能仅仅因为稍稍不同的参数的设置。除此以外，既然是对单细胞进行研究，那么就必须使分选得到的确实是单个细胞，不然就毫无意义。

3、活性

对于后续实验来说，细胞活性状态尤为重要，以转录组分析为例，高质量的RNA样本不管是RNA-Seq还是高通量表达谱芯片技术均需要，RNA会由于细胞活性不好或死细胞而直接降解，导致无法继续实验。