流式单细胞分选前的准备

流式单细胞分选是对细胞（或微粒）的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术。

上样前的准备

细胞仪能够对细胞进行分选，分选后的细胞能够进行培养或功能性研究。为了保证分选后细胞不受污染，需要清洁的环境，所以样本制备，上机检测分选等过程必须严格遵循无菌技术要求进行操作。

1.无菌PBS 5L，无菌蒸馏水 5L，70%乙醇（用无菌蒸馏水配制）3L这些无菌工作液应用无菌技术进行制备。

2.将3L 70%乙醇 加入到干净的鞘液筒中，将盖子盖紧，对鞘液筒进行振摇，使乙醇充分洗涤桶内壁，将鞘液筒安好。

3.短接过滤器，不然滤膜将会被乙醇破坏掉。

4.收集管接口处用70%乙醇进行冲洗，并且对进样口处的空气进行喷洒。

5.如果不使用浓缩器，那么将2支BD50ml收集管安装在收集管接口处。

6.将一支装有70%乙醇的进样管放上。

7.设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。

8.从Acquiremenu选择SortSetup。

9.在SortGate菜单中选择步骤７设定的分选门。按液流控制键RUN。

10.在Setup方框中打叉，点击AcquisitionControl菜单中Acquire。

11.往支收集管中加入乙醇，一直到注满2支收集管，然后对Pause，Abort进行点击。

12.将上面的步骤重复两次。

13.将鞘液筒断开，将500mL无菌蒸馏水加入到鞘液筒中，对鞘液筒进行振摇，将液体倒掉，对该操作反复操作一直到将桶内壁残余乙醇洗净为止。

14.将3L无菌蒸馏水加入到鞘液筒中，将盖子盖紧，将鞘液筒安好。

15、将2支新的收集管安装到收集管接口处。

16.将一支装有无菌蒸馏水的进样管放上去。

17.对AcquisitionControl菜单中Acquire进行点击。

18.将无菌蒸馏水往收集管中注入，直到注满2支收集管为止，点击Pause，Abort。

19.将上述步骤重复两次。

20.将鞘液筒断开，将3L无菌PBS加入到鞘液筒中，将盖子盖紧，再将鞘液筒安好。

21.将2支新的收集管安装在收集管接口处。

22.将一支装有无菌PBS的进样管放上。

23.对AcquisitionControl菜单中Acquire进行点击。

24.当第yi支收集管收集15mLPBS后，将第yi支收集管取下，使PBS由左至右往下一收集管流入，将操作重复进行，一直到2个管都收集了15mLPBS为止，对Pause，Abort进行点击。

25.将2支新的收集管安装在收集管接口处，如果要对动物细胞进行分析，那么需要对无菌技术进行应用，用无菌PBS/4%BSA缓冲液过夜包被50mL锥型管，在收集接口安置包被好的锥型管。

26、按下述分选步骤分选样本。