单细胞分选免疫磁珠法简介和流式操作

免疫磁珠细胞分选方法可以在几分钟内从复杂的细胞混合物中分离出很高纯度的细胞。

免疫磁珠细胞分选简介

使用超顺磁性的MACS微型磁珠特异性记细胞，在完成磁性标记以后，在置于强而稳定磁场中的分选柱上经过这些细胞，一个高梯度磁场有分选柱里的基质引起。

未被标记的细胞从柱里流出，而被磁性标记的细胞则在柱里滞留，当从磁场中移出分选柱以后，能够洗脱出在柱内滞留的磁性标记细胞。

超顺磁性的MACS MicroBeads 具有极小的体积，比真核细胞的一百万份之一还要小，类似于病毒的大小，其直径约为50nm。即使在扫描电镜照片上也几乎看不到标记细胞上的微型磁珠，只需要几分钟就能够完成磁性抗体和磁性标记物间的反应。

因为微型磁珠具有极小的体积，因此对细胞不会造成机械性压力，而且具有很短的孵育时间和很快的操作过程。MicroBeads可以使一个稳定的胶体液形成，它们在磁场中既不凝聚也不沉淀。

由于微型磁珠的大小和组成成份，能够进行生物降解，而且不会对细胞激活或者对细胞的功能和活力产生影响，也不会改变细胞的生理功能。不需要去除磁珠，所以在分析和随后的实验中能够立刻使用阳性分选出的细胞。

用MACS 细胞分选系统能够将非常纯的细胞群体分离出来，并且回收率和存活率非常好。按照不同的细胞频率和标记表达水平，MACS分离细胞的的MACS分离细胞的超过90%，纯度能够达到95%-99.9%。

流式操作流程

（1）单细胞悬液的制备

（2）样本染色

①荧光报告蛋白

②蛋白标记

③核酸标记

（3）细胞分选

鞘液和样品往喷嘴流进后，在电磁传感器产生的高频振荡下，使得稳定的液滴形成，之后将正或负电荷标记在荧光染色确认的细胞上，Z后利用电偏转从而分离。

（4）分选后的细胞能够进一步做分子生物学研究。