1、毛细管电泳仪概述
毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)又称GX毛细管电泳(high performancecapillary electrophoresisHPCE)是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。毛细管电泳实际上包含电泳、色谱及其交叉内容,它使分析化学得以从微升水平进入纳升水平,并可进行单细胞分析,乃单分子分析。GX毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进:采用了25-100μm内径的毛细管;采用了高达数千伏的电压。毛细管的采用使产生的热量能够较快散发,大大减小了温度效应,使电场电压可以很高。电压升高,电场推动力大,又可进一步使柱径变小,柱长增加,毛细管电泳的柱效远高于HPLC,理论塔板数高达几十万块/米毛细管电泳(CE)基本原理电泳是指带电离子在电场中的定向移动,不同离子具有不同的迁移速度,迁移速度与哪些因素有关?当带电离子以速度ν 在电场中移动时,受到大小相等、方向相反的电场推动力和平动摩擦阻力的作用。 电场力:FE = qE,阻力:F =fν,故:qE = fνq—离子所带的有效电荷; E—电场强度; ν—离子在电场中的迁移速度; f—平动摩擦系数 (对于球形离子:f=6πηγ;γ—离子的表观液态动力学半径;η—介质的粘度; )
CE所用的石英毛细管柱,在pH>3时,石英毛细管壁上的硅醇基(—SiOH)在水溶液中发生电离,产生的SiOˉ负离子使毛细管壁内表面带负电,和溶液接触时相应的缓冲液带正电,形成了双电层。
毛细管柱是CE的核心部件,目前多为25~75μm之间,材料为聚四氟乙烯、玻璃和弹性石英,以石英居多。
选择细内径毛细管柱有利于Z大散热,但比表面积大,会增加溶质的吸附作用。
与HPLC相比,CE的特点是:
(1)分析速度快,柱效高;(2)几乎不消耗溶剂,样品用量小;(3)前处理简单,甚至无需前处理;(4)可自由选择被分离物质的类型,使 图谱清晰;(5)毛细管容易清洗,不容易产生柱污染。
CE也存在许多不足之处:
(1)灵敏度和线性范围不如HPLC;(2)仅能够实现微量制备;(3)定量精密度稍低于HPLC。
应用:
离子分析;体内药物分析;中药分析;手性拆分;蛋白质、多肽、氨基酸分析;DNA、RNA分析;抗生素、维生素、糖类、单细胞分析。
2、仪器介绍
Agilent G1600A,HP/Agilent 3DCE system毛细管电泳 (CE)为带电物质,比如生物分子、小分子碱性或酸性药物和离子提供快速分离、出色的效率和分离度,而这些分离使用HPLC常常难以实现。CE还适用于样品量非常有限的分离应用,所需要的缓冲液要比液相色谱或离子色谱少得多。使用单机模式,作为CE/MS的分离组件、或者作为液相色谱的辅助和正交分析技术。
3、性能参数
加压系统
进样口压力在–100 到+100 mbar的范围可编程;可采用1 bar冲洗,也可用2–12 bar高压冲洗;在毛细管入口和出口端可对样品瓶加2–12 bar的高压。
进样模式
自校正进样系统,可在入口端或出口端进样;编程范围: 长达10000秒;压力进样: –100 到+100 mbar;电动进样: –30 到+30 kV;自动进样器/馏分收集器;50位样品瓶盘;从毛细管入口和出口端对所有样品瓶可以随机进样。
物理参数
规格
宽度:35cm,高度:59cm,厚度:51cm,重量:35kg。
电源要求
电源电压:100-240V,Z高300W,电源频率:50-60Hz。
接口
LAN、CAN、RS232、远程控制、模拟信号输入(1V, 20 bit, 与A/D转换器集成)、模拟信号输出电泳功率。
电压范围:
0 到± 30 kV 电源可设定;电流:0 - 300 μA可设定;功率:0 - 6 W可设定,恒电压、电流和功率操作外部水浴控温范围为10–40 °C。(不冷凝条件下,Z低水浴温度+1 °C)。
补充缓冲液为入口端和出口端样品瓶重新注入新配制的缓冲液的卫星站,实现自动连续操作。可选择缓冲液液面高度。
样品瓶100 μL (聚丙烯或玻璃),采用可重复密封的压盖瓶盖;1 mL (聚丙烯),采用可重复密封的压盖瓶盖;2 mL (玻璃),采用可重复密封的压盖瓶盖;毛细管卡套;采用帕尔帖元件的高速强制空气冷却器;温度范围:室温以下10 °C,Z高60 °C (卡套Z低温度10 °C);Z短的毛细管总长度:33 cm;毛细管外径365 μm;检测器;实时紫外二极管阵列检测器(190–600 nm);可控温;波长分辨率:1 nm;响应时间:0.025 到10 s;光源: 预定位氘灯或高亮度灯;信号: 采用安捷伦化学工作站同时记录多达8个信号和采集全光谱图;灵敏度: 1 μM 4-羟基-乙酰-苯酮,进样条件50 mbar • 5 sec,3 x 50 μm鼓泡毛细管,信噪比>6*(20 mM 硼酸缓冲液,pH 9.3, 25 kV);基线噪声: <50 μAU (于响应时间2 秒);线性动态范围: 1x104 (3 x 50 μm鼓泡毛细管)。
4、配置清单
1 G1600A CE1600毛细管电泳仪,带自动进样器样品瓶,缓冲液瓶CE1600 Capillary ElectrophoresisInstrument. Installation Qualification kit,High Sensitivity Detection Cell kitand Services。
2 Chemsation色谱工作站 ChemStation EditionWorkstation. Software-only, withPC。
3 Diode Array Detector 二极管阵列检测器。
4 M41 安装费Installation Charges。
5、注意事项
1. 所有仪器设备必须安放在平整坚固的表面,标准高度距地面约90CM,并保证没有任何震动影响仪器的日常使用。
2.请保证相邻的仪器设备之间存在至少10CM(4英寸)的间距,并在后部留出足够的空间(约15公分即6英寸)这样可以保证仪器设备的基本散热需要,并提供足够的日常维修维护空间。
3. 请避免将仪器设备安装在温度,湿度变化比较明显的位置,比如阳光直射区域,靠近敞开窗口的区域和空调出风口附近等。
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