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细胞培养箱的作用

  细胞培养箱是细胞、组织、细菌培养的一种先进仪器,是开展免疫学、肿瘤学、遗传学及生物工程所必须的关键设备,广泛应用于微生物、农业科学、YL实验等科学研究和生产。

细胞培养的原理

  将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。

  细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。

细胞培养箱.jpg

为什么细胞培养需要在细胞培养箱中?

  CO2既是细胞代谢产物也是细胞所需成分,主要与维持培养液的pH有直接关系。动物细胞多数需要微碱性环境,pH为7.4左右。在细胞培养过程中,随着CO2释放量的增多,培养基会变酸,因此常加入NaHCO3来调节pH。NaHCO3具有释放CO2的倾向,加入CO2可以YZ这个反应的进行。

  细胞培养箱中CO2浓度应与培养液中NaHCO3浓度相平衡,细胞培养箱的气体环境一般是95%的空气和5%的CO2

  并非只有细胞培养箱才能做细胞培养,主要是细胞培养箱可以省去很多麻烦。普通的恒温培养箱,生化培养箱也可以做细胞培养。但是要时刻监视溶液中的PH值,湿度,工作量增加很多,失败概率也增大很多。所以细胞培养一般在细胞培养箱中。

细胞的初代培养

  初代消化培养法:

  1、准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

  2、布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。

  3、处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。

  4、剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。

  5、消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。

  6、分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。

  7、计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。

  8、培养:置于36.5℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需要换新塞。

  初代组织块培养法:

  1、剪切:把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,吸静Hanks液,用眼科剪反复剪切1mm3块为止。

  2、摆布:用弯头吸管吸取若干小块,置于培养瓶中,用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部,小块相互距离以0.5cm为宜,每25ml培养瓶底可摆布20~30块。

  3、轻轻翻转培养瓶,另瓶底向上,注意翻瓶时勿另组织小块流动,塞好瓶塞,置36.5℃温箱培养2小时左右(勿超过4小时),使小块微干涸。

  4、培养:从微箱中取出培养瓶,开塞,46度斜持培养瓶,箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许,然后缓缓再把培养瓶翻转过来,让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。

细胞培养箱的作用.jpg

细胞的传代培养

  1、吸除旧的DMEM培养液:拿出吸管(要拿吸管的上端),插入与抽滤瓶相连的橡胶管中,在酒精灯外焰灼烧灭菌,细胞培养瓶倾斜将吸管插入瓶底部一角,吸出旧的DMEM培养液,将用后的吸管弃于废弃缸里。

  2、消化:拿出5mL移液管,酒精灯过火灼烧,吸取2mL0.25%胰酶,混匀,放于37℃孵箱中消化5-6min。取下用后的移液管。

  3、中和:从孵箱中拿出培养瓶,显微镜下观察细胞是否被完全消化下来,5mL灭菌后移液管加入3mLDMEM培养液终止消化。反复吹打混匀;吸出中和液转移到50mL离心管中。

  4、离心收集细胞:配平后离心200×g,3min。将新的DMEM培养液加入新培养瓶中,2mL/瓶(培养瓶底面积为25cm2)。

  5、重悬细胞:离心后吸出中和液,(先吸出表面泡沫,一定注意不要吸出细胞)。加入新DMEM培养液(按2mL/瓶和细胞传代数计算加入的培养液体积),反复吹打使细胞充分混匀,要尽量减少产生气泡。

  6、分装:混匀后将细胞分装,按2mL/瓶得体积加入培养瓶中,充分混匀。记号笔标记细胞名称,培养液,细胞传代数,传代日期,实验人员。

  7、培养:将细胞放于37℃,4%CO2细胞培养箱培养。将0.25%胰酶,细胞培养液密封好放于4℃冰箱中保存。

  8、清洁安全柜:实验完毕后,盖灭酒精灯,关闭真空泵,用酒精棉球擦干净操作台表面。

  9、观察:每天观察细胞,并记录细胞生长状态。

细胞培养的注意事项

  1、紫外消毒过程中会产生臭氧分子,对人体有害。一般情况下,消毒后至少半小时后再进入。

  2、所有的实验器材都要经过消毒处理;所有的细胞操作都在安全柜中进行,每一步都要注意不能用手碰到瓶口,培养液不能碰到瓶口,拿培养瓶时要使培养瓶瓶口微微翘起。

  3、细胞消化时间不能太长,要让细胞尽快脱离不舒服的环境;离心时离心机转速不能太高,实验前要设定好离心转速和时间;重悬细胞时要保证细胞完全混匀,在显微镜下观察细胞是一个一个的。

  4、传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次Z好只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。

  5、每天观察细胞形态,掌握好细胞是否健康的标准:健康细胞的形态饱满,折光性好,生长致密时即可传代。

2004-10-16 浏览次数:3459次
本文来源:https://www.yiqi.com/daogou/detail_1109.html
延伸阅读
  • 培养箱的发展现状
    我国制造培养箱的历史也已有几十年的历史了,在世界培养箱市场的中低端我们占有一席之地。培养箱适用于环境保护、卫生防疫、药检、农畜、水产等研究、院校、生产部门。是水体分析,细菌、霉菌、微生物的培养、保存,植物栽培,育种实验的专用恒温设备。

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  • 培养箱的种类
    培养箱的种类繁多,目前应用最为广泛的培养箱主要有生化培养箱、二氧化碳培养箱、电热恒温培养箱、隔水式电热恒温培养箱四种类型,每种类型都有其特点和独特的功用,以用于不同的科研及教学领域。

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  • 培养箱的应用
    培养箱具有制冷和加热双向调温系统,是植物、微生物、遗传等科研部门不可缺少的实验室设备,被广泛应用于低温恒温试验、培养试验、环境试验等。近年来,随着科学技术的发展,培养箱为生命科学及生化医药领域带来新变革。

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  • 培养箱的选购
    用户对培养箱都有两条最基本的要求:一是要求培养箱能够对温度和湿度提供最精确稳定的控制,以便于其研究工作的进展;二是要求培养箱能够对培养箱内的微生物污染进行有效的防范,并且能够定期消除污染,以保护研究成果,防止样品损失。

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  • 培养箱的维护保养
    培养箱,具有制冷和加热双向调温系统,温度可控的功能,是植物、生物、微生物、遗传、病毒、医学、环保等科研、教育部门不可缺少的实验室设备,广泛应用于低温恒温试验、培养试验、环境试验等。

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