大肠杆菌测定仪的使用

大肠杆菌测定仪是测定饮用水、食品中大肠杆菌的仪器。大肠杆菌是食品和饮用水安全的重要指标，对饮食安全有重要意义。那么大肠杆菌测定仪如何使用，如何测定大肠杆菌呢？

一、大肠杆菌测定仪操作流程

1、除去培养瓶外包装，打开其瓶盖；

2、在培养瓶中注入测试水直至100ml；

3、轻轻搅拌至培养基完全溶解，注意：不要起泡沫

4、用瓶盖将培养瓶盖紧；

5、将培养瓶放入AquasurePro3000TM测试单元中并盖好；

6、使用AC220V，DC12V，输出电流为1A的电源适配器（每台仪器均配置一个），电源适配器的一端插在仪器上，另一端插在220V电源上后，检查是否接好电源线，长按电源开关至绿灯亮，显示仪器开始正常运转。

7、在完成温孵（24小时以内，主要由使用样品决定）后，观察样品颜色变化与否，即可表明其中是否含有大肠杆菌。

二、大肠杆菌检测仪细菌的分离鉴定

1、标本：肠道外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。

2、分离培养与鉴定：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。血液需先经肉汤增菌，再转种血琼脂平板。其他标本可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。37℃孵育18～24小时后，观察菌落并涂片染色镜检。采用一系列生化反应进行鉴定。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要时检定肠霉毒素。

泌尿系统除确定大肠杆菌外，还应计数，每毫升尿含菌量≥100，000时，才有诊断价值。

三、大肠杆菌检测仪卫生细菌学检查

大肠杆菌不断随粪便排出体外，污染周围环境和水源、食品等。取样检查时，样品中大肠杆菌越多，表示样品被粪便污染越严重，也表明样品中存在肠道致病菌的可能性越大。故应对饮水、食品、饮料进行卫生细菌学检查。

1、细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，采用倾注培养计算。ZG规定的卫生标准是每毫升饮水中细菌总数不得超过100个。

2、大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。ZG的卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群；瓶装汽水、果汁等每100ml大肠菌群不得超过5个。

四、大肠杆菌检测仪食品检测方法

大肠菌群MPN 计数法

1、样品的稀释

1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品,放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,

8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min,或放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋

中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。

1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶

（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。

1.3 样品匀液的pH 值应在6.5～7.5 之间，必要时分别用1 mol/L NaOH 或1 mol/L HCl 调节。

1.4 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL 磷酸盐缓冲液

或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支1 mL 无菌

吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。

1.5 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释

1 次，换用1 支1 mL 无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。

2、初发酵试验

每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3

管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1 mL，则用双料LST肉汤），36

℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续

培养至48 h±2 h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。

3、复发酵试验

用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36 ℃±1

℃培养48 h±2 h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。

4、大肠菌群Z可能数（MPN）的报告

按3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录B），报告每g（mL）样品中大肠菌群的

MPN值。

五、大肠菌群平板计数法

1、样品的稀释

按上一方法稀释

2、平板计数

2.1 选取2个～3个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。同时取1 mL生理盐

水加入无菌平皿作空白对照。

2.2 及时将15 mL～20 mL冷至46 ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。小心

旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA复盖平板表层。翻转平

板，置于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。

3、平板菌落数的选择

选取菌落数在15 CFU～150 CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。

典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm 或更大。

4、证实试验

从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36 ℃±1 ℃

培养24 h～48 h，观察产气情况。凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。