暗视野显微镜的原理|结构|用途

　　暗视野显微镜又叫暗场显微镜，是一种通过观察样品受侧向光照射时所产生的散射光来分辨样品细节的特殊显微镜。暗视野显微镜和明场不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射击光线。因此，视场成为黑暗的背景，被检物体则呈现明亮的象。

暗视野显微镜的原理

　　1、丁达尔现象

　　光通过浑浊媒质(烟、雾、悬浮液和乳状液等)时，浑浊介质所呈现的光的强烈的散射现象。暗视野显微镜是以丁达尔效应为基础，即以胶体粒子的反射和散射现象为基础而设计的。

　　2、暗视野显微镜的工作原理

　　暗视野显微镜应用丁达尔现象，使用特殊的聚光器，照明光线不能直接入射到物镜之内，使入射光线经聚光器斜向照明被检样品，利用样品表面的散射光和反射光进行观察。暗视野显微镜视野内所看到的图像不是透过样品的直射光线形成的，而是由被检样品表面所散射和反射的光形成的，所以暗视野中看到的是被检样品的衍射光图像，非物体本身。暗视野照明法是斜射照明法的一种。

　　3、暗视野显微镜的优点

　　暗视野显微镜具有对微小物体的分辨能力，对大小在0.004μm以上的微小粒子，虽然看不清楚样品的细微结构，亦可清晰地分辨其存在和运动。

　　4、暗视野显微镜的缺点

　　由于暗视野显微镜是利用被检样品表面散射的光层而观察物体的，所以，在黑暗的视场中只能看到被检样品的存在与运动，但不能辩清样品内部的细微结构。

暗视野显微镜的结构

　　暗视野显微镜和一般的明视野显微镜区别在于二者的聚光器不同，暗视野显微镜装有一个ZY遮暗的聚光器，使光线不能通过聚光器，而只能从聚光器四周边及未遮暗的部位斜射到载玻片的标本上。因光线是斜射的，不能进入物镜，故观察的视野是暗的，而聚光器斜射到菌体上的光线，因光散射作用而使菌体发出亮光，反射到物镜内，这样在显微镜中可见到暗视野中明亮的物像。暗视野显微镜主要用于检查未染色标本的形态和运动能力。

暗视野显微镜的特点

　　暗视野显微镜常用来观察未染色的透明样品。这些样品因为具有和周围环境相似的折射率，不易在一般明视野之下看的清楚，于是利用暗视野提高样品本身与背景之间的对比。

　　暗视野显微镜能见到小至4~200nm的微粒子，只能看到物体的存在、运动和表面特征，不能辨清物体的细微结构。暗视野显微镜在普通的光学显微镜上换装暗视野聚光镜后，由于该聚光器内部抛物面结构的遮挡，照射在待检物体表面的光线不能直接进入物镜和目镜，仅散射光能通过，因而视野是黑暗的。

　　暗视野显微镜由于不将透明光射入直接观察系统，无物体时，视野暗黑，不可能观察到任何物体;当有物体时，以物体衍射回的光与散射光等在暗的背景中明亮可见。在暗视野观察物体，照明光大部分被折回，由于物体(标本)所在的位置结构，厚度不同，光的散射性，折光等都有很大的变化。

　　普通显微镜下可以看到0.45um的细节，而暗视野显微镜下竟能看到0.2-0.004um的极徽小物体。这个范围的物体叫亚粒子，因此暗视野显微镜也可以称裂隙限外显微镜。暗视野显微镜特别适用于胶体化学领域中观察溶质粒子的布朗运动，适用于观察原虫、细菌的鞭毛、伪足运动，医学检验学范围适用于观察人体体液中螺旋体、尿管形、结晶或各种粒子。在这一点上，暗视野显微镜远比其他种类显微镜要优越得多。

暗视野显微镜的用途

　　暗视野显微镜检查是一种检查梅毒螺旋体的方法。暗视野，顾名思义即是显微镜下没有明亮的光线，它便于检查苍白的螺旋体。这是一种病原体检查，对早期梅毒的诊断有十分重要的意义。

　　早期皮肤粘膜损害可查到苍白螺旋体。一期梅毒苍白螺旋体多在硬下疳的硬结、溃疡的分泌物和渗出液中存在，肿大的淋巴结穿刺也可检出。二期梅毒苍白螺旋体可在全身血液和组织中检出，但以皮肤检出率Zgao。早期先天性梅毒，可以通过皮肤或粘膜损害处刮片发现梅毒苍白螺旋体。Z近，通过羊膜穿刺术获得孕妇的羊水，以其作暗视野显微镜观察，对先天性梅毒有诊断价值。

　　暗视野显微镜适用于在普通显微镜下看不见的微小活体，不染色生物体样品标本，观察其形状和轮廓。广泛适用于科研、教学、YL、防疫和农牧等行业。