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透射电镜全称透射电子显微镜,是一种高分辨率、高放大倍数的显微镜,是材料科学研究的重要手段,能提供极微细材料的组织结构、晶体结构和化学成分等方面的信息。
组织取材(60s内),体积<1mm3,之后进行如下步骤:
1、前固定:3%戊二醛2h或过夜。
2、漂洗:磷酸缓冲液,3次,10min/次。
3、后固定:1%锇酸固定液,2h。
4、漂洗:磷酸缓冲液,3次,10min/次。
5、梯度脱水:50%丙酮,70%丙酮,80%丙酮,90%丙酮两次,各10min。1**%丙酮两次,各15min。
6、渗透:丙酮/包埋剂(1:1、1:2),室温各1h。丙酮/包埋剂1:3,4度过夜。纯包埋剂,4度过夜。
7、包埋:纯包埋剂(37度、45度、60度各24h)。取出包埋块,进行超薄切片,片厚70nm。分别采用醋酸双氧铀对切片进行染色30min,双蒸水漂洗3-5次,之后用柠檬酸铅染色10min,双蒸水漂洗3-5次。待切片干燥后,透射电镜观察。
一、样品杆插入步骤:
1、更换前一定要观察银屏diyi页,检查样品杆位置是否在ZX位置;
2、确认灯丝处于关闭状态!
3、使用样品杆上的引导钉(guide pin)对齐样品插口,然后插入到样品杆停下后(此时不可松手!),等待响声直至样品杆被吸住,再将“PUMP/AIR”开关打至“PUMP”一侧,松手静候(一般超过10min)。
4、等角度计(goniometer)的绿灯亮后,屏幕P3页显示P4值接近30,顺时针轻转插入一段后,等待V2和V5B均打开后再顺时针轻转继续插入直到终止,注意整个过程吸力很大,一定要拉紧样品杆,使之慢慢进入。
5、插入完毕后一定要等goniometer的绿灯亮,检查P3页的P4值,P4值应该≤30,阀2打开,右侧下方SIP真空在10^-5级,并指针指向中间方可打开灯丝进行观察。
6、整个插入样品杆的过程中,切勿大幅度摇动样品杆,整个过程要轻、缓慢地进行;人体的任何地方都不可接触样品杆O环到样品杆顶端位置。
二、样品杆拔出步骤:
1、关闭透射电镜灯丝电流;
2、用观察窗左侧“SPEC
CONTROLLER”控制面板上的N键复原样品杆位置到原点附近(注意在没有插入样品杆时,严禁使用“N”键!)或用控制球复原;确认样品位置“specimen
position”为原点:
3、将Goniometer的“pump/Air”打倒“Air”一侧;
4、轻轻将透射电镜样品杆往外拉,拉一段后,会感觉到拉不动,此时稍稍停顿后逆时针轻轻转动一小角度后,再往外拉,很短的距离后,会又拉不动,此时再逆时针轻轻转动一小角度,停顿一会会听到两声阀门启动的声音,然后会感觉到样品杆没有吸引力了,再轻轻拔出样品杆;
5、整个过程中,拉动样品杆要沿着goniometer的轴拉动,不能大幅度摇晃,而且手要一直握住样品杆。整个过程要轻、缓慢地进行;人体的任何地方都不可接触样品杆O环到样品杆顶端位置。
三、样品在样品杆上更换步骤:
1、要把透射电镜样品杆放在样品杆架上;
2、用专门工具一手将样品铜网支撑金属片固定夹抬起,另一手用大捏子夹住铜网支撑金属片,把金属片放到旁边支架,螺丝孔对准支架上的螺丝;
3、用专用螺丝批轻轻拧松2个固定螺丝(不要拧下来,只要拧松即可);
4、轻轻移开固定铜网的弹片(小心损坏铜网);
5、用专用捏子轻轻取出铜网,放上新铜网;
6、重新将固定铜网弹片盖上铜网(注意观察位置,如不对,则要进行调整);
7、用拧紧螺丝固定弹片,一手用专用工具抬起样品架上的固定夹,一手用大捏子将金属片放到固定夹正确位置上,放下固定夹。
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