流式细胞仪荧光抗体组合的选择

流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点，是当代Z先进的细胞定量分析技术之一。下面就让小编带你了解一下流式细胞仪荧光抗体组合的选择。

用不同颜色的荧光素来标记不同类别的单克隆抗体，能够在一个细胞中同时分析多个抗原分子，然而不是所有荧光抗体都能够自由的组合的，在确定组合之前，还需要注意下列因素。

1.流式细胞仪的类型和荧光光谱

挑选合适的光源作为荧光物质的激发光源，流式细胞仪的光谱滤光片能够接受被检测的荧光物质发出的荧光。

2.了解不同抗体的染色模式和细胞反应谱

依据不同的实验目的选择抗体。

胞膜和胞内染色：一般来说，先胞膜染色，固定，然后膜通透和胞内染色，Z后DNA染色。

3.抗体结合荧光素的荧光强度

任何一种荧光素的相对荧光强度都不相同。一个特定的抗体，要区分阴性和阳性的结果，就是有很好的S/N比值，由该抗体使用哪一种荧光素标记决定。

4.抗原的密度

几乎所有荧光素标记的抗体都能够检测高表达的抗原。但是低表达的抗原（例如细胞因子）就需要用高S/N比值的荧光素标记的抗体来检测，从而有效的区分阳性细胞群和阴性细胞群。

5.荧光光谱之间的重叠

在多色分析中，虽然能够用荧光补偿去除荧光光谱重叠对结果的影响，但是分析中使用的荧光探针的类别越多，补偿的复杂性就会越大，所以分析时，Z好选择光谱重叠较少的组合。

6.自发荧光

所有的细胞群的自发荧光的水平都不一样，在高波长范围内（波长>600nm），自发荧光会快速降低。所以在检测自发荧光水平比较高的细胞时，如果想要得到好的S/N比值，就要使用发射光波长比较长的荧光染料。

7.荧光素的溶度，试剂的质量都能造成假阴性/阳性结果

一个抗体组合内的抗体可能来自不同的公司，有不同的浓度和亚型，因此，需要自身的同型对照，但现实是非常难的。所以Z好选择同一家公司的试剂以免干扰。