流式细胞仪细胞染色方法

流式细胞术是一种生物学技术，用于对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。流式细胞术（Flow CytoMetry，FCM）是对悬液中的单细胞或其他生物粒子,通过检测标记的荧光信号，实现高速、逐一的细胞定量分析和分选的技术。

其特点是通过快速测定库尔特电阻、荧光、光散射和光吸收来定量测定细胞 DNA含量、细胞体积、蛋白质含量、酶活性、细胞膜受体和表面抗原等许多重要参数。根据这些参数将不同性质的细胞分开，以获得供生物学和医学研究用的纯细胞群体。下面就让小编给你简单介绍一下流式细胞仪的细胞的染色方法。

染色方法主要有直接免疫荧光染色法和间接免疫荧光染色法。

直接标记就是在标记的时候加入连接着荧光素的特异性抗体，这种方法相对比较简单，因此在各个实验室被广泛的使用

间接标记是用特异的无荧光标记的一抗和被检测的标本反应，除去没有结合的抗体，然后加入荧光标记的二抗，生成含有荧光的抗原-抗体-抗体混合物。这样的操作不仅复杂而且耗费时间，所以现在基本很少用这种方法。在科学研究中想要一些新的抗体但是没有直接抗体时，只好用这种方法。

依据细胞部位的不同，可以分为细胞表面和细胞内抗。

细胞表面染色：

大多数免疫表型分析都采用细胞表面染色方法。因为很多抗原同时存在细

胞里，因此在细胞表面抗原检测时必须十分留意保持细胞膜的完整从而保证检测的特异性。表面标记又分溶血前标记和溶血后标记两种。如果红细胞对标记产生影响或血浆成分对标记产生影响的，应该采用溶血后标记，但要注意溶血剂膜抗原的影响，所以，溶血剂通常不包括固定剂。像免疫球蛋白轻链检测和阵发性血红蛋白尿的检测等。

细胞内染色：

有些胞内抗原的检测对白血病的免疫分型十分重要，像TdT,MPO,

cCD3,cCD79a。胞内染色的要点是使细胞膜通透，把抗体或核酸染料导入胞内但是不影响细胞骨架的完整性。不仅如此，还要保证固定和透膜的步骤不影响有关抗原与相应抗体的结合力和核酸与染料的结合。一些适用于胞内染色的试剂可能不适用于表面标记分析。一般胞内染色不能与细胞活性的检测同时进行，除非用EMA的方法。对于胞内染色，所用的荧光素必须小到能够穿透到胞膜内。对于某些核酸染料（如DAPI、TO、AO等）为活细胞染料，无需固定或透膜。

胞膜和胞内染色：通常，先胞膜染色，固定，膜通透和胞内染色，Z后是DNA染色。