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细胞培养指的是在体外模拟体内的环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等),让它生存、生长、繁殖并且能够维持主要的结构和功能的一种方法。细胞培养在生物学中又叫做细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术,还是其中之一的生物克隆技术来说,细胞培养技术可以通过一个细胞培养成为大量的单细胞或极少分化的多细胞,细胞培养技术是细胞生物学研究方法中及其重要和常见的技术,由细胞培养不仅能够获取大量细胞,还能够借此研究细胞其他的相关知识。
营养条件
1.培养基
细胞培养基包括细胞生长所需的各种营养物质,例如碳水化合物、氨基酸、无机盐、维生素等。对于不同细胞的营养需求,可以选择多种合成培养基,如DMEM、Eagle、EBSS、RPMll640、MEM等。
2.其他添加成分
除了各种合成培养基提供基础营养物质以外,还需要根据不同细胞和不同的培养目的添加其他成分,如血清、因子等。
血清相当于动物细胞离体培养的天然营养液,为动物细胞培养提供像矿物质微量元素、脂肪和激素的生长必需因子,通常使用小牛血清。血清的添加比例取决于细胞的不同和研究目的的不同。10%~20%比例的血清可以保持细胞较快的生长增殖速度,被叫做生长培养液;如果只想要保持细胞不死或缓慢生长,那么只需要2%~5%比例的血清就可以,被叫做维持培养液。在血清中同样有像补体、免疫球蛋白和一些生长YZ因子这样不利于细胞细胞生长和繁殖的物质。血清活性会随着动物的不同或者血清批次的不同而有很大的差别,从而影响培养效果的稳定性。
谷氨酰胺是细胞生长重要的氮源,在细胞生长代谢过程中起重要作用,谷氨酰胺需要在使用前再添加,因为谷氨酰胺在溶液中状态很不稳定,很容易降解。在4℃的温度下放上一周就能够分解差不多一半。
培养基中还需要加入一定量的抗生素,以避免污染,常用抗生素名称、浓度及敏感性如上表。
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