大肠杆菌生长曲线的测定

大肠埃希菌是人体不可缺少单细胞生物。大肠埃希菌，俗名大肠杆菌（ 革兰氏阴性短杆菌），周身鞭毛，能运动，无芽。是人和动物肠道中的正常栖居菌。大肠埃希菌的致病物质之一是血浆凝固酶。下面就让小编带你了解一下大肠杆菌生长曲线的测定。

基本原理

向恒容积的液体培养基里进行一定量的细菌接种，如果其培养条件适宜，那么该群体就会有规律的增殖，细菌的生长曲线指的是以细胞数量的对数或者生长速率作为纵坐标，以培养的时间作为横坐标绘制而成的曲线。此曲线包含延滞期、指数期、稳定期以及衰亡期四个阶段。

使用分光光度计进行光电比浊测定不同培养时间下细菌悬浮液的光密度值，然后对生长曲线进行绘制。

实验材料

1.培养基：LB液体培养基  2.菌种：大肠杆菌

3.仪器与耗材：无菌吸管、无菌试管、恒温摇床、722型分光光度计。

操作步骤

1.配置100毫升LB液体培养基，用1支试管（每支5毫升），向250毫升的三角瓶中装入剩余的培养基，在121摄氏度下进行20分钟的灭菌。

2.取无菌大试管11支，将培养时间分别在这11支大试管上用记号笔标记出，就是0h、1.5h、3h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h以及20h。

3.使用5毫升无菌吸管往装有LB液体培养基的三角瓶里转入培养了12个小时的2.5毫升大肠杆菌培养液。混匀后往标记过的11支大试管内放入5毫升混合液。

4.往摇床上放上已经接种的试管经过37摄氏度200rpm振荡培养，在相应的时间取出试管放入冰箱，Z后一起对OD600的值进行测定。

5.在进行光密度的测定时，将没有接种的LB液体培养基作为空白对照，从开始取出的培养液依次进行测定，对于细胞密度比较大的培养液需要使用液体培养基后再进行测定，让OD600的值保持在0.1到0.65的范围以内。

注意事项

1、选用的试管规格必须一致。

2.每支试管需要有相同的装液量（5ml/支）。

3.在向比色皿中加入混匀的菌悬液后应该快速地对OD的值进行读取。

4.对比色皿进行保护，不能磨损其透光面，不要直接使用手指接触。

5.在未测样品时应该及时打开分光光度计的盖子。