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简单的说,PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。下面就让小编带你了解一下PCR的常见问题和常见故障。
常见问题
1.为什么在不同型号的PCR仪上扩增出的条带亮度有差异?
答:不同的PCR仪有不一样的优化的升降温策略,因此当向另一类PCR仪转移这类CR仪上使用的PCR步骤参数上时,需要进行试验优化。
2.在PCR实验结束后我的样品可以一直放在PCR仪中低温保存吗?
答:Z好不要,建议在程序运行结束之后,应当将样品从PCR仪中及时取出。当低温保存时,尽量设定比较高的温度,能够使得仪器的使用寿命延长。
3.模拟管和样品台控温模式有什么差别?
若采用样品台控温模式,当将样品台升降温到目标温度时,因为传热延迟,样品管内样品达到目标温度仍需要较长的时间,因此,当步骤时间在30s以下时,Z好使用模拟管控,若要使用样品台控温模式,那么Z好延长一倍步骤时间。
4.反应后反应管壁出现液滴?
可能原因1:在程序运行前,热盖加热功能没有被开启。
方法:将热盖加热功能开启。
可能原因2:在反应结束后,过长时间的低温保存。
方法:在结束运行后,热盖将自动关闭,因此会出现冷凝,这不会影响实验的结果,在离心机上放置反应管,瞬时离心使液滴回到管子底部就行。
5.使用的微孔板,反应后反应液有明显蒸发?
方法:(1)保证使用的微孔板质量很好,在反应之前,要密封严格。(2)保证热盖盖紧,将热盖的温度适当提高。(3)将反应体积增大。
6.使用PCR管,反应后部分PCR管内反应液有明显蒸发?
方法:(1)确保使用的PCR管质量很高。(2)将四个同样的空PCR管分别置于样品台的四角,从而使证热盖压在各PCR管上的压力均匀得到保证。
常见故障
1.加热或者冷却速度缓慢
出现这样的情况,原因可能是控制器或机械故障,需要运行诊断测试并记录加热速率。
2.开机时,出现错误信息
这种情况有可能是仪器某一系统启动失败或者电压太低造成的。确保同一电路中没有使用其他电器,不要在已有用电器电路上增设线路。
3.打开电源然而仪器不响应
出现这种情况,很可能是因为插座没有插紧或者电源线脱落,只要重新插入电源就行。
4.屏幕不显示并且马达和风扇不启动
出现这种情况,很有可能是总保险丝被熔断,只要将保险丝更换就能使故障排除。
5.插上电源屏幕空白或,按下某键屏幕不显示相应画面
出现这样的情况,很可能是逻辑电路或者电源的保险丝被熔断,也有可能是因为控制器,对保险丝进行更换,如果不能恢复正常,那么就咨询维修工程师。
06-19
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