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利用在电场作用下带电粒子向极性相反的电极方向移动的现象来实现多组分物质分离、分析的仪器设备,称为电泳仪。
影响电泳的因素
1. 温度
如果温度过高,那么可能会加宽样本分离带;使对流产生,容易导致待分离物的混合;容易造成热敏感样本的蛋白质变性;可能会降低介质黏度,降低电阻,从而对电泳效果产生影响。
2. 电渗
电泳过程中液体对固体的相对移动,称为电渗,若电渗方向和待分离分子电泳方向一致,那么电泳速度加快,反之就减慢。。
3. 支持介质
支持介质的筛孔,能够使分子分离,具有分子筛的作用。待分离生物大分子的电泳速度受到筛孔大小的影响明显。筛孔大的介质中,电泳速度快,反之则慢。另外,介质的黏性起到吸附作用,会对泳动阻碍。
4. 电场强度
电场强度越大,电泳速度越快。然而,通过介质的电流强度会随着电场强度的增大而增大,导致电泳过程中产热过多,升高了介质的温度,从而对电泳效果产生影响。降低电流能够使产生的热量减少,然而会使电泳时间延长,使得待分离生物大分子的扩散减慢从而对分离的效果产生影响。
5. 溶液性质
主要在样本溶液的pH、离子强度和黏度等方面体现。带电粒子的解离程度受到pH影响,物质所带净电荷的多少取决于pH。当pH为蛋白质的等电点时,蛋白质所带净电荷为零,此时蛋白质在电场中不会发生移动。
0.02-0.2的离子强度适合电泳。若离子强度过高,带电颗粒会溶液中与其电荷性相反的离子在自己周围形成离子扩散层,从而使得粒子的电泳迁移速度降低。若离子强度过低,溶液pH变化会对电泳迁移速度产生影响。
基本原理
在正常情况下,物质分子所带正、负电荷量相等,带电性不显示。然而在一定的物理作用或化学反应条件下,某些物质分子会成为带电的粒子。利用由于带电性质、颗粒形状、大小及所带电量差异,带电粒子移动速度及方向也不一样的性质,来分离和分析样本中不同成分。
分类
根据原理不同分为:等速电泳、等电聚焦电泳、免疫电泳等。
根据电泳中是否使用支持介质分为:自由电泳和区带电泳。
根据自动化程度不同分为:半自动电泳和全自动电泳。
根据用途不同分为:蛋白电泳、核酸电泳等。
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