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琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
一、配胶
根据所要分离的DNA分子的大小,对琼脂糖粉末进行适量的称取,再锥形瓶中放入称好的琼脂糖粉末,再将适量的1×TAE电泳缓冲液。
然后在微波炉内放入溶液加热摇匀到完全溶化呈现透明状,适当冷却后再将其往胶托内倒入。
在胶完全冷凝后将其放入电泳槽,胶面必须完全浸没于电泳槽的缓冲液里。
二、点样
由于样品之间的差异,点样体系也不相同,点样体系包括如下两种:
1.样品能够直接进行点样。
2.样品+6Xloading buffer
Z后要记住点marker,并且将胶的位置摆正。
三、电泳
点样完成后,将电源连接上,将电源的参数设置好,开始电泳。当溴酚蓝(蓝色)移动到一定的长度,电泳就能够停止。
电压的要求为:每1厘米胶小于需要不超过20伏特的电压样品出孔时,使用1厘米胶3伏特的低压15分钟,然后将电压调回到标准电压,能够跑出比较好的条带。
四、EB染色
溴化乙淀为一种扁平分子,它能够往核酸双链的配对碱基之间嵌入,当紫外线对EB-DNA复合物照射的时候,其有不一样的效应出现。
值得注意的是:要对污染区和非污染区严格地区分,不要往非污染区放入从污染区拿到的物品,应当要及时丢弃碰到过EB的手套。
五、成像拍照
图像的摄录,处理和打印通过图像分析系统一体化。为了使条带不丢失,使摄录凝胶图像在低照度下的灵敏度有所保证,需要采用高分辨率的CCD。
六、胶图分析
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