寡核苷酸探针的使用方法

分子杂交（molecular hybridization）是指使单链核酸碱基序列确定的技术。待测单链核酸与已知序列的单链核酸（叫做探针）间通过碱基配对使可检出的双螺旋片段形成为分子杂交的基本原理。下面就让小编带你了解一下寡核苷酸探针的使用方法。

概念

靶基因上单个核苷酸的点突变能够通过寡核苷酸探针来检测到。

寡核苷酸探针种类

单一已知序列的寡核苷酸探针和许多简并性寡核苷酸探针组成的寡核苷酸探针库为两种主要常用的寡核苷酸探针。

1.许多简并性寡核苷酸探针组成的寡核苷酸探针库

2.单一已知序列的寡核苷酸探针

单一已知序列寡核苷酸探针可以配对它们的目的序列，能够将杂交条件准确地设计出来，使探针不和序列相近的非完全配对序列杂交，仅和目的序列杂交，对于一些未知序列的目的片段则没有效果得到保障。

注意事项

1.这种方法是多加一个磷酸在每个探针的5'末端，从理论层面来说，这会对于其与DNA的杂交产生影响。所以，高放射性的寡核苷酸探针能够通过使用Klenow DNA聚合酶的链延伸法获得。

2.不仅有通常使用的同位素标记探针，也可以使用非同位素标记探针。

操作准备：

试剂：T4多核苷酸激酶，[γ-32 P] ATP以及10×T4多核苷酸激酶缓冲液。

设备：恒温水浴锅，高速离式离心机等。

材料：待标记的寡核苷酸。

操作步骤：

1.在30ml水中溶100ng寡核苷酸，将溶液加热到65℃变性5min，再快速地在冰溶中将其放置。然后立刻将2mlT4多核苷酸激酶，10ml[g-32P]ATP以及5ml10×激酶缓冲液加入到溶液中加水变成50ml的溶液混合均匀后放置于37℃水浴中水浴20min。之后再将20单位T4多核苷酸激酶加入，放置于37℃水浴中水浴20min之后马上放入冰浴中。Z后使用Sephadex G-50柱层析。