分子杂交DNA的变性与复性

分子杂交（molecular hybridization）是指使单链核酸碱基序列确定的技术。待测单链核酸与已知序列的单链核酸（叫做探针）间通过碱基配对使可检出的双螺旋片段形成为分子杂交的基本原理。下面就让小编带你了解一下Southern杂交方法。

DNA变性

概念

DNA变性是指两条DNA链间的氢键在某些理化因素的作用下断裂成单链的过程。

变性方法：

1.化学试剂变性

例如双链核酸分子链间的氢键在尿素、甲酰胺、甲醛等化学试剂的作用下断裂。

2.酸碱变性：

双链核酸分子链间的氢键当PH值大于10或者小于3时会发生断裂。

3.热变性

双链核酸分子链间的氢键在温度升高到90-100摄氏度时会完全断裂。

复性

概念

复性或者杂交指的是在一定的条件下，根据碱基互补原则，变性的单链核酸分子重新结合成双链核酸的过程。

如寡核苷酸和RNA、寡核苷酸和DNA、RNA和RNA、RNA和DNA以及DNA和DNA这些具有互补序列的两条单链核酸均能够互补形成双链。

复性过程

1.单链分子之间发生碰撞使局部双链形成。

2.如果局部双链周围的碱基不配对，那么双链即会重新解离。

3.如果如果局部双链周围的碱基配对，那么就会使ZX序列形成。

4.完整的双链分子形成。

分子杂交的一般步骤

1.对DNA或者RNA样品进行制备

2.结合固定基质

3.在80摄氏度下真空固定

4.预杂交

5.将标记探针加入进行杂交

6.洗涤

7.放射自显影或显色反应