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分子杂交核酸探针的制备方法

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分子杂交(molecular hybridization)是指使单链核酸碱基序列确定的技术。待测单链核酸与已知序列的单链核酸(叫做探针)间通过碱基配对使可检出的双螺旋片段形成为分子杂交的基本原理。下面就让小编带你了解一下Southern杂交方法。


探针概念

一段带有检测标记已知的核苷酸序列,其和目的基因或者目的DNA特异互补。


制备方法

50-300bp通常为合适的长度,有时长度达到1.5kb。

1.化学合成

2.PCR扩增

3.DNA重组技术


02.gif


分类

按照不同的性质和来源,探针包括以下几类:

1.寡核苷酸探针

2.RNA探针

3.cDNA探针

4.基因组DNA探针


核酸分子杂交方法

根据待测核酸是否在固相支持物上固定来分可以分为:

1.液相杂交

(1)核酸酶S1保护分析法

(2)RNA酶保护分析法

2.固相杂交

(1)原位杂交

(2)膜上印迹杂交


根据分子种类来分可以分为:

(1)Western印迹杂交

(2)Northern印迹杂交

(3)Southern印迹杂交


标记的种类

1.非同位素

荧光素、地 高 辛配体以及生物素等标记物


2.同位素

125I、3H、35S以及32P等标记探针


寡核苷酸探针合成的注意事项

1.如果和非靶序列有连续8个以上的相同碱基序列或者有超过百分之七十同源性,那么不用为好。

2.防止连续出现同一碱基

3.探针内防止互补

4.G:C对含量Z好在百分之四十到百分之六十之间。

5.长度Z好在10到50bp之间。


2005-07-19 浏览次数:1230次
本文来源:https://www.yiqi.com/daogou/detail_3735.html
热门标签: Southern杂交预杂交和杂交Southern杂交方法
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