多肽合成常见的问题（一）

多肽是α－氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，是蛋白质水解的中间产物。由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽，同理类推还有三肽、四肽、五肽等。通常由10~100个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫多肽。

常见问题

1.如果合成的多肽溶解性不好，多肽就有问题对吗？

答：多肽的溶解性及合适的溶剂是什么很难准确预测，若多肽难以溶解就表示多肽合成出现问题，显然这种想法不对。

2.多肽状态是如何储存的？

答：提供的多肽通常呈灰白色，粉末状，多肽粉末的颜色根据组成不同会存在差异，通常多肽短期可以在4摄氏度下避光保存，长期则需要在-2摄氏度下避光保存。

3.如何溶解多肽？

答：多肽溶解相当复杂，通常合适的溶剂很难立刻确定。需要先取一点进行实验，千万不能在合适的溶剂确定之前就全部溶解。如下方法能够对选择合适的溶剂有所帮助。

（1）对多肽的电荷设定进行判定，设定碱性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2为+1，酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH为-1，其他氨基酸的电荷为0，将电荷数计算出来。

（2）若净电荷数小于0，则多肽为酸性，用水溶解，若溶解性不高或者不能溶解，则将25ul氨水加入，再将500ul水加入稀释。

（3）若净电荷数等于于0，则多肽为中性，通常需要使用如乙腈，甲醇或异丙醇，DMSO等有机溶剂进行溶解。

（4）若净电荷数大于0，则多肽为碱性，用水溶解，若溶解性不高或者不能溶解，则将10%以上醋酸加入，若多肽依然不能溶解，将少量TFA(25ul)加入，再将500ul水加入稀释。

4.多肽合成的基本原理是什么？

答：多肽合成化学的一个重大的突破，即为多肽固相合成法。能够连续进行合成过程，不需要对中间产物进行纯化为它的Zda特点，并且奠定了多肽合成自动化的基础。目前为止，全自动多肽的合成基本上均是固相合成。以Fmoc化学合成为基础，首先通过共价键形式连接所要合成的目标多肽的C-端氨基酸的羧基和一个不溶性的高分子树脂，再将这一氨基酸的氨基作为多肽合成的起点，和别的氨基酸已经活化的羧基作用构成肽键，将这一过程不断重复，就能够使多肽获得。由于多肽的氨基酸组成差异，多肽后有不一样处理方式和纯化方式。

5.做免疫用的多肽多长为合适？

答：通常在10-15个氨基酸左右，长一些会有更好的免疫效果，然而却会增加合成的成本。MAP多肽长度Z好超过15aa，如此才会有比较好的效果。除此以外，若多肽的长度小于10aa，免疫效果则不理想。

6.免疫用多肽的纯度需要很高吗？

答：通常来说，免疫用Peptide，纯度达到70-85%就行了。