核酸提取仪CTAB法用途以及步骤

CTAB为一种阳离子去污剂,其的特性为能够在低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，然而不会沉淀核酸。再利用有机溶剂抽提，将蛋白、多糖、酚类等杂质去除以后，将乙醇加入沉淀，就能够分离出核酸。

用途

主要用来生物DNA的提取。

步骤

1.在65℃水浴中将 2%CTAB抽提缓冲液预热。

2.在研钵中放入约300mg实验材料，使用液氮将其磨至粉状。

3.将700ul的2%CTAB抽提缓冲液加入，轻轻搅动。

4.在1.5 ml的灭菌离心管中分倒入磨碎液磨碎液的高度约为三分之二管高。

5.在65℃的水浴槽或恒温箱中放置，每隔10分钟轻轻摇动，30~60分钟后取出。

6.冷却两分钟以后，将氯仿-异戊醇（24：1）加入，加满管，剧烈振荡2~3分钟，混合均匀。

7.将其放入离心机中以10000rpm离心10分钟，同时在另一新的灭菌离心管中加入600 ul的异丙醇。

8.10000rpm离心1分钟以后使用移液器对清液轻轻地吸取，向着含有异丙醇的离心管内转移，慢慢上下摇动离心管30s，充分混合异丙醇与水层，使DNA絮状物能被看见。

9.10000rpm离心1分钟后，将液体立即倒掉，留心不要倒出白色DNA沉淀，在铺开的纸巾上倒立离心管。

10.1min中以后，将离心管直立，将720ul的75%乙醇及80 ul 5M的醋酸钠其中，轻轻转动，用手指弹管尖，使得沉淀于管底的DNA块状物在液体中浮游。

11.放置半个小时，溶解DNA块状物的不纯物。

12.以10000rpm离心1min后，将液体倒掉，再将800ul75%的乙醇加入，洗涤掉DNA半个小时。

13.以10000rpm离心30s后，将液体立即倒掉，在铺开的纸巾上倒立离心管，数分钟后，将离心管直立，使DNA干燥。

14.将50ul0.5 × TE(含RNase)缓冲液加入，溶解DNA，在37℃恒温箱放置大约15个小时，消解RNA。

上述是比较通用的CTAB法,在实验时，为了获得Z佳实验结果，可以按照不同材料加以改进。