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DNA提取过程中分离纯化方法

核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来使得样本核酸提取工作自动完成的仪器。其在环境微生物检测、食品安全检测、输血安全、法医学鉴定、疾病控制中心、临床疾病诊断、生物学研究以及畜牧业等多种领域得到广泛地应用。下面就让小编带你了解一下DNA提取过程中分离纯化方法。


纯化要求:

对酶(如核酸内切酶、DNA聚合酶等)有抑制作用的成分不应存在于核酸样品中,应当降低其它生物大分子如蛋白质、多糖、多酚和脂类分子等污染到最低程度,对其它核酸分子的污染也应当排除,若提取DNA时,应当将RNA去除,若提取RNA时,应当将DNA去除。


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纯化方法:

细胞破碎后,杂质的去除以及DNA的纯化通常使用吸附材料结合方法,主要有磁珠、阴离子交换树脂以及硅基质材料等。由于硅基质材料使用方便、快捷,能够对核酸DNA特异吸附,有毒溶剂如酚、氯仿等不需要使用,其使提取基因组变得和过滤一样简单,所以硅基质材料成为大规模分离纯化DNA的通用方法。利用DNA与硅基质材料在高盐低pH值环境下相结合,在低盐高pH值环境下与硅基质材料脱离的特征。其机理可能是高浓度盐离子对硅基质水分子结构产生了破坏,使得阳离子桥形成,当盐被清除后,基质和DNA之间的吸引力被再水化的硅石破坏了,所以从硅基质上将DNA洗脱下来。


注意事项:

1.避免基因组DNA的生物降解,主要是DNase使得基因组DNA降解,DNase需二价金属阳离子如Mg2+等的激活,可以使用EDTA等金属离子螯和剂螯和Mg2+来对DNase的活性进行抑制。


2.使化学物质对DNA的降解减少,在pH值4.0-10.0的条件下进行操作以防过酸、过碱会破坏DNA双链中磷酸二酯键。


3.操作步骤尽量的简化,使提取过程缩短,从而使破坏核酸的各种有害因素减少。


2019-08-13 18:01:07 浏览次数:68次

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