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表面等离子共振技术,简称SPR,是从20世纪90年代发展起来的一种新技术,对在生物传感芯片(biosensor chip)上配位体与分析物之间的相互作用情况的检测是SPR应用原理。在各个领域得到广泛地应用。
亲和力捕获表面组氨酸标签蛋白
(HisCap和HisHiCap芯片)
HisCap芯片附着蛋白质的方式是采用了NTA-Ni技术。在这种技术中,由表面附着的NTA-Ni复合物和感兴趣蛋白质的组氨酸的侧链咪唑共同协作。这种技术十分有效的前提即是蛋白质的组氨酸需要充足。6个组氨酸为典型的组氨酸标标记,然而3个也行。
HisCap芯片为His-tagged蛋白的直接固定提供了一个Z便利的手段,也对任何带有足够数量的组氨酸残基的蛋白十分适用。
聚组氨酸标签蛋白的固定因HisCap芯片而可逆和稳定,HisCap芯片也能够保证更加简单地进行表面等离子共振(SPR)实验。
连有固定蛋白的基线十分稳定,能够做动力学分析实验。
HisCap芯片优势:
1.如果条件温和,能够再生芯片。比如咪唑以及EDTA。
2.HisCap芯片能够重复使用。
3.在实验室的重组蛋白工作中,His-tagging是一个长期建立的标准技术。
4.利用HisCap芯片可以使捕获的His-tagged蛋白产生的基线稳定。
胺基偶联固定
(COOH1和COOH2芯片)
因为胺基基团非常普遍,因此对于绝大部分的生物分子来说,通过胺基偶联固定配体均适用。到目前为止,只要使用该方法随机固定配体,一般都可以获得高质量的结果。所以直接固定特定位点一般没有必要。
使用NHS和EDC含水混合物对羧基活化,使得胺基活性脂产生为Z常使用用的方法。该流程具有如下优点:
1.生物分子不需要在恶劣的条件中暴露。
2.固定的条件非常容易控制,能够避免和表面过度交叉连锁。
3.用于制备化学试剂。冻存数月
4.不需要标记,也不需要衍生作用,就能够对绝大多数生物分子进行固定。
5.有大量稳定的共价键产生,从而避免了配体从表面滤掉。
6.在广泛的pH值中,十分有效果。
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