DNA测序仪操作准备

手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定，手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法，事实上，目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了，在这几款DNA测序仪中，临床检测实验室使用Z多的一种型号要属310型。

操作准备

1、需要按照测定的dna片段来对正向或反向引物进行设计，配制成3.2μmol/l，如果有通用引物序列包含于重组质粒中，那么也能够使用如t7引物、m13(-21)引物等通用引物。

2、三蒸水或者灭菌去离子水。

3、pe公司生产的0.2ml或0.5ml的pcr管，盖体分离。

4、在70ml蒸馏水中溶入称取的40.8g 3mol/l 醋酸钠(ph5.2)，将冰醋酸的ph调到5.2，定容至100ml，高压灭菌后分装。

5、abi生产的10×电泳缓冲液。

6、abi prism 310型全自动dna测序仪。

7、台式冷冻高速离心机。

8、袖珍离心机或者台式高速离心机。

9、bigdye mix为bigdye测序反应试剂盒的主要试剂，普通dntp，amplitaq dna polymerase fs，反应缓冲液以及peZL四色荧光标记的ddntp也包含其中。

10、试剂盒配套试剂，0.2g/L pgem-3zf (+) 双链dna对照模板 。

11、3.2μmol/L m13(-21)引物。

12、本实验测定的质粒dna浓度为0.2g/L，质粒dna、单链dna以及pcr产物等均能够作为dna测序模板，在pcr反应时，应当调整模板浓度为1μl。

13、无水乙醇以及70%乙醇。

14、取2.5ml 3mol/l以及37.5ml无水乙醇混合均匀，制成naac/乙醇混合液，在室温条件下有1年的保存期限。

15、abi生产的pop 6测序胶。

16、abi生产的模板YZ试剂

17、9600型或者2400型pcr仪。

现状和意义

21世纪di一个十年里，DNA测序与生物云计算、个性化分子诊断、基因芯片、人类基因组计划等等吸引无数眼球的热门词汇息息相关。在创意新天地里，生物技术和信息技术相互融合，相互作用，相互影响。

在业内，DNA测序有着高贵的出身，其将碱基序列这一基因密码破解，融合了IT技术与基因组学，将生物信息学这一新兴学科开创和发展了出来。传统的生物学技术被以生物信息学为代表的基因技术彻底颠覆了，对生命科学未来发展潮流起到引ling作用，在YL健康、环境保护、新能源、新材料、现代农业等热门领域以它为代表的基因工程得到了广泛地应用。

从前将致病相关基因从数万个人类基因中筛选出来犹如大海捞针。为了对这个基因究竟在何处想方设法的定位，科学家需要对同一个家族的多位患者的标本进行获取。设计高通量药物，致病或抑病基因的鉴定、疾病易感人群的筛查甚至个性化YL由于具备了如今快速测序技术和SNPs这个强有力的工具而不再是需要向往的事。