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手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定,手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法,事实上,目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了,在这几款DNA测序仪中,临床检测实验室使用Z多的一种型号要属310型。
自动测序法
基因分析仪是一台对DNA片段的碱基顺序或大小进行测定和定量的精密仪器,其能够实现灌胶自动化,进样自动化,数据收集分析自动化。DNA测序胶(POP 6)和GeneScan胶(POP 4)等凝胶高分子聚合物也由PE公司来提供,这些凝胶有着均一的孔径,从而使得配胶条件不一致对测序精度的影响避免了,毛细管电泳装置、Macintosh电脑、彩色打印机和电泳等附件为其主要的构成部件。由于全新的CCD摄影机检测器为其所使用,因此将PCR片段大小分析和定量的时间缩短为10~40分钟,将DNA测序缩短至2.5小时。
因为该仪器具有DNA测序,PCR片段大小分析和定量分析等功能,所以能够进行微卫星序列分析、长片段PCR、RT-PCR(定量PCR)等分析、杂合子分析、单链构象多态性分析(SSCP)、DNA测序。在临床方面,不但能够进行常规DNA测序,微生物与病毒的分型与鉴定、法医学上的亲子和个体鉴定、HLA配型、单核苷酸多态性(SNP)分析、基因突变检测等均能够进行。
该仪器的应用相当地广泛,能够进行进行dna测序、杂合子分析、单链构象多态性分析(sscp)、微卫星序列分析、长片段pcr、rt-pcr(定量pcr)等分析,临床上不但能够进行常规dna测序,而且还能够进行法医学上的亲子和个体鉴定、微生物与病毒的分型与鉴定、基因突变检测、hla配型、单核苷酸多态性(snp)分析等。该仪器之所以有如此多的用途是因为该仪器具有dna测序,pcr片段大小分析和定量分析等功能。
在DNA测序商业化的浪潮下,完成5个以上有重大经济价值的基因或蛋白的转化应用、约500个新的功能基因的发现,10000种微生物、100种动植物基因组测序等目标在我国《生物产业发展“十二五”规划》中被提出。根据30-50万元为微生物进行“基因组完成图”测序的大致费用而言,千亿元级别为DNA测序带来的市场容量,其还只是DNA测序商业应用市场的冰山一角。
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