不能作测序引物的PCR引物有哪些

手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定，手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法，事实上，目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了，在这几款DNA测序仪中，临床检测实验室使用Z多的一种型号要属310型。

客户自己提供的pCR引物可能会引发测序引物问题，只要正确使用，通用测序引物通常不会有太大问题。测序引物并不是所有用于pCR的引物均能够使用这点应当明确。

不能作测序引物的PCR引物：

1、有特殊标记的引物

有特殊标记的引物主要是荧光标记的引物。测序反应的四种碱基均是荧光标记的，如此，荧光标记的引物会造成干扰。除此之外，测序建议也不要使用其他一些有大的标记基团的引物，DNA片段的迁移率会受到引物上大的标记基团的直接影响，会得出峰型不好或错误的测序结果。

2、不纯的引物

测序引物对纯度有着非常高的要求，比较强的背景可能会由合成的引物中非全长的片段导致。例如一个20bp的测序引物，如果直接脱盐纯化的话,Z高只有70%的纯度，背景噪音由30%的引物构成，如此，测试结果将会受到严重的影响。通常要想达到测序的基本要求，通常使用PAGE或OPC法纯化。

3、简并引物

简并引物必定需要有多个结合位点位于测序模板上，对于测序结果会产生直接的影响。

4、随机引物

随机引物通常均不是太长，需要比较低的退火温度，与模板在测序反应的条件下不能很好地结合。

5、过长的引物

测序引物Z大长度不能够长于30bp，测序引物不长于24bp是通常的要求。在测序模板上，在测序反应的较低的条件下过长的引物容易有多个结合位点，会测序结果背景。除此之外，引物较长很难保证其纯度。高于90%一般是对用于测序的引物的纯度的要求。如果引物纯度低，那么会明显增大测序反应的背景，会对测序结果造成直接的影响。

从前将致病相关基因从数万个人类基因中筛选出来犹如大海捞针。为了对这个基因究竟在何处想方设法的定位，科学家需要对同一个家族的多位患者的标本进行获取。设计高通量药物，致病或抑病基因的鉴定、疾病易感人群的筛查甚至个性化yi疗由于具备了如今快速测序技术和SNPs这个强有力的工具而不再是需要向往的事。

DNA测序方法的飞速发展除了使人类的全基因组序列为我们所知晓，而且还使得我们充分掌握了小麦、水稻、家蚕以及很多细菌。此时，科学家们的新目标也就变成了对一段序列所代表的生物学意义的探明。用于编码基因仅仅只有1.5%存在于核苷酸组成的庞大序列中，除此以外，扮演调控基因表达的角色有少许，其中功能未知的“垃圾DNA”占绝大部分，这一发现是科学家通过分析人类基因组序列获得的。由表面可知，人与人之间有着缤纷复杂的不同之处，然而，深入到DNA水平上，却仅仅存在0.1%基因编码序列上的不同。大多数时候，人与人之间在一条序列上的差异只有一个核苷酸，科学家将这种现象命名为单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，简称SNPs）。