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双脱氧链末端终止法改进和特点

手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定,手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法,事实上,目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了,在这几款DNA测序仪中,临床检测实验室使用最多的一种型号要属310型。


双脱氧链末端终止法改进

改进电泳方法:

毛细管电泳法为电泳方法主要的改进方法。在毛细管中被分离物质的电泳指的是毛细管电泳。陈列毛细管电泳法在992年被Mathies等首先提出,激光聚焦荧光扫描检测装置被采用,25只毛细管并列电泳,每只毛细管能够有350bp在1.5h被独处,DNA序列拥有能够达到6000bp/h的分析效率。


改进标记物方面:

如生物素、地gao辛、银染法、荧光标记物等化学发光物非放射性物质在许多实验室替代放射性同位素被开始利用。它们在双脱氧法测序时作为标记物对反应的产物进行示踪测序。 测序的结果zui后通过酶显色反应或者荧光信号显示出来。相较于传统的放射性同位素方法,这些方法能够更加容易、安全、快速地检测,也有比较低的费用。


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双脱氧链末端终止法特点

化学测序法的优点双脱氧链末端不但具备,而且其对于大规模的测序更加的适用。然而一个合成反应所需的特异性的引物以及一个纯净的单链DNA模板被要求具有,所以,单链噬菌体为模板是早期的工作,有局限性,引物为若干个不同的特定限制性内切酶酶解片段,引导合成于模板链的不同部位,从而使噬菌体DNA的核酸序列得以确定。但是对于大量存在着的天然双链DNA分子,由于分离链的技术不是很高以及制备产量不良好,从而使双脱氧链末端终止法的应用程度限制住了。


 Sanger DNA测序仪的发展历程

1977: 提出了Sanger DNA法测序概念

1986:电泳使用了Hood and smith荧光标记dNTP

1987:生产出了di一台自动测序仪

1990:毛细管电泳在DNA测序上被应用

2003:完成了人类基因组测序工作


全球最大的基因组测序及研究应用中心之一位于深圳的华大基因研究院,华大基因承担了人类基因组计划1%的工作任务,之后又对国际HAPmap计划进行了参与与完成,并且将叫做“炎黄一号”di一个中国人也是di一个亚洲人的基因组测序完成了。


有50余个研究小组在威康信托基金会中,其是英国最大的生物医学资助机构之一。双向障碍病、冠心病、克罗恩氏病、风湿性关节炎、高血压以及I型糖尿病和II型糖尿病等多疾病的基因的筛查这一项颇具野心的庞大计划和挑战由他们在过去的几年开展了。有24处与上述7种疾病相关的位点通过对1.7万名英国人的SNPs筛查分析,在基因组中被找到,有10个致病基因在II型糖尿病的筛查中被找到和证实。


2019-09-11 15:56:14 浏览次数:83次