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引物对测序质量的影响

手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定,手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法,事实上,目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了,在这几款DNA测序仪中,临床检测实验室使用最多的一种型号要属310型。


引物对测序质量的影响

(1)引物二聚体

现象:后面比较正常,前面高于100bp,有较高的噪音

原因:没有将引物二聚体去除干净。

方法:将胶割掉,进行纯化。


(2)双引物结合

现象:有两个峰从一开始就出现,和非单克隆有区别。

原因:有两个引物结合位点在模板上,同时结合两个引物。

方法:对两个引物重新设计


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(3)模板没有引物结合位点

现象:特异性的峰图不存在。

原因:引物不能和模板结合。

方法:对引物重新设计


(4)引物合成时多或者少一个碱基

现象:有相同荧光信号的小尾巴位于每个峰后面。

原因:引物合成时多或者少一个碱基

方法:将引物重新合成。


(5)引物不纯

现象:整个峰图均有较高的噪音

原因:有较多杂质在引物中,引物具有比较低的纯度。

方法:脱盐纯化的引物具有比较低的纯度,不适合测序,然而可以用来做普通pcr;测序引物zui好使用PAGE或者HPLC纯化过的。


在DNA测序商业化的浪潮下,完成5个以上有重大经济价值的基因或蛋白的转化应用、约500个新的功能基因的发现,10000种微生物、100种动植物基因组测序等目标在我国《生物产业发展“十二五”规划》中被提出。根据30-50万元为微生物进行“基因组完成图”测序的大致费用而言,千亿元级别为DNA测序带来的市场容量,其还只是DNA测序商业应用市场的冰山一角。


21世纪di一个十年里,DNA测序与生物云计算、个性化分子诊断、基因芯片、人类基因组计划等等吸引无数眼球的热门词汇息息相关。在创意新天地里,生物技术和信息技术相互融合,相互作用,相互影响。


2019-09-11 15:59:45 浏览次数:79次