DNA模板、困难模板以及机器对测序质量的影响

手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定，手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法，事实上，目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了，在这几款DNA测序仪中，临床检测实验室使用Z多的一种型号要属310型。

DNA模板、困难模板以及机器对测序质量的影响

1、DNA模板

（1）杂合子

和正常峰值相比，杂合子信号处只有其一半的强度大小，同时大小相等。

（2）非单克隆

特点：右边全部如同杂合子，左边非常清晰。

原因：挑克隆的时，混合了两个质粒。

方法：将克隆重新挑，将DNA重新制作。

（3）仪码突变

由于点突变导致在450bp的地方仪码，又由于点突变在528bp的地方恢复。

（4）模板不纯

现象：有其它颜色位于每个峰下面。

原因；测序时pcr助贷混合杂带。

方法：凝胶电泳将主带回收，将测序重新进行。

（5）点突变

若有碱基在模板上突变，那么测序图像中其它位点通常均是单一峰形，然后有重叠峰突然出现在某一位点。

2、机器影响

（1）毛细管

（2）其它

3、困难模板

（1）重复序列

（2）回文结构

（3）高GC

（4）特殊结构

（5）Ploy结构

当今世界，如果要评说哪个地方会诞生传奇，那么必定是高科技领域，从前DNA测序还作为一个前沿技术令人高山仰止，如今却成为一个生命科学常规技术，迅速地得到普及，目前为止，能够和电脑芯片运算能力增强的速度相媲美的也就只有DNA测序成本下降的速度，DNA测序的发展除了在降低成本方面得到了体现，还在高通量测序大幅度提高了工作效率方面得以表现，其铺平了DNA测序产业化的道路。

从前将致病相关基因从数万个人类基因中筛选出来犹如大海捞针。为了对这个基因究竟在何处想方设法的定位，科学家需要对同一个家族的多位患者的标本进行获取。设计高通量药物，致病或抑病基因的鉴定、疾病易感人群的筛查甚至个性化YL由于具备了如今快速测序技术和SNPs这个强有力的工具而不再是需要向往的事。