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dna测序问题与解答以及第三代测序技术效果

推荐访问 dna测序指标和技术路线DNA模板、困难模板以及机器对测序质量的影响纯化对测序质量的影响引物对测序质量的影响双脱氧链末端终止法改进和特点

手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定,手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法,事实上,目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了,在这几款DNA测序仪中,临床检测实验室使用Z多的一种型号要属310型。


问题与解答

怎样选择(设计)测序用引物?

答:测序用引物,和PR用引物不相同,有着非常严格的要求。PR用引物通常仅需可以与模板结台端的几个碱基完全配对,就算引物长度有80碱基,仅需对PCR反应亲件进行调整,就可以使PCR反应成功进行,然而测序用引物却不一样,必须要对如下要求严格遵守。


1、GC含量应当选择大约50%,对A、T、G、C的连续结构,尽可能避开。


2、对引物二聚体结构等复杂结枚或引物自身形成发夹结构避开。


3、使引物和模板1**%匹配得以保证,尤其是必须1**%匹配3端的几个碱基。同时必须使引物和模板之间只能有一个结合位点严格保证。


5.jpg


4、通常选择20个碱基,按照GC含量进行适当调整,大约15~25个碱基为其长度。


5、3‘端尽可能选择G或C碱基,从而使与模板的结合能力得以增加。


6、大约50℃~70℃应当为选择的Tm温度。


DNA测序样品用什么溶液溶解比较好?

答:Z好使用灭菌蒸馏水对DNA测序样品进行溶解。


提供DNA测序样品时,提供何种形态的比较好?

 答:菌体被提供比较好,通过我们队质粒进行提取,如此,能够获得比较稳定的DNA样品。然而样品纯度和数量必须值得注意。尤其是PCR产物为测序样品时,应当对DNA的纯度和数量特别留心。PCR产物应该回收胶,不然的话,良好的测序效果不能够获得。


第三代测序技术效果:

1、它能够达到999999%的精度,精度非常的高。


2、RNA序列能够直接被测出来。


3、甲基化的DNA序列能够直接被测出来。


4、它使DNA聚合酶内在自身的反应速度得以实现,10个碱基一秒就能够测出来,测序速度2万倍于化学法测序。


5、它使得DNA聚合酶内在自身的 processivity(延续性,也就是DNA聚合酶一次可以合成很长的片段)实现了,非常长的序列一个反应就能够测出来。上百个碱基能够通过二代测序测出,然而几千个碱基能够通过三代测序测出。非常好的条件提供给了基因组的重复序列的拼接。


21世纪di一个十年里,DNA测序与生物云计算、个性化分子诊断、基因芯片、人类基因组计划等等吸引无数眼球的热门词汇息息相关。在创意新天地里,生物技术和信息技术相互融合,相互作用,相互影响。


在业外人士眼里,DNA测序足以成为“一项新技术衍生出一个新行业”的典范,非常的高科技,国内外VC和PE视之为宠儿,其在相当短旳时间内得到了非常迅猛的发展。它十年后的发展蓝图还没有人能准确描绘出来,由此可见其的发展速度的快速。所有预测相对于日新月异的DNA测序技术来说均会显得保守。


2005-09-11 浏览次数:1329次
本文来源:https://www.yiqi.com/daogou/detail_3908.html
热门标签: dna测序指标和技术路线双脱氧链末端终止法改进和特点
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