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dna测序问题与解答以及第三代测序技术效果

手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定,手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法,事实上,目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了,在这几款DNA测序仪中,临床检测实验室使用最多的一种型号要属310型。


问题与解答

怎样选择(设计)测序用引物?

答:测序用引物,和PR用引物不相同,有着非常严格的要求。PR用引物通常仅需可以与模板结台端的几个碱基完全配对,就算引物长度有80碱基,仅需对PCR反应亲件进行调整,就可以使PCR反应成功进行,然而测序用引物却不一样,必须要对如下要求严格遵守。


1、GC含量应当选择大约50%,对A、T、G、C的连续结构,尽可能避开。


2、对引物二聚体结构等复杂结枚或引物自身形成发夹结构避开。


3、使引物和模板100%匹配得以保证,尤其是必须100%匹配3端的几个碱基。同时必须使引物和模板之间只能有一个结合位点严格保证。


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4、通常选择20个碱基,按照GC含量进行适当调整,大约15~25个碱基为其长度。


5、3‘端尽可能选择G或C碱基,从而使与模板的结合能力得以增加。


6、大约50℃~70℃应当为选择的Tm温度。


DNA测序样品用什么溶液溶解比较好?

答:zui好使用灭菌蒸馏水对DNA测序样品进行溶解。


提供DNA测序样品时,提供何种形态的比较好?

 答:菌体被提供比较好,通过我们队质粒进行提取,如此,能够获得比较稳定的DNA样品。然而样品纯度和数量必须值得注意。尤其是PCR产物为测序样品时,应当对DNA的纯度和数量特别留心。PCR产物应该回收胶,不然的话,良好的测序效果不能够获得。


第三代测序技术效果:

1、它能够达到999999%的精度,精度非常的高。


2、RNA序列能够直接被测出来。


3、甲基化的DNA序列能够直接被测出来。


4、它使DNA聚合酶内在自身的反应速度得以实现,10个碱基一秒就能够测出来,测序速度2万倍于化学法测序。


5、它使得DNA聚合酶内在自身的 processivity(延续性,也就是DNA聚合酶一次可以合成很长的片段)实现了,非常长的序列一个反应就能够测出来。上百个碱基能够通过二代测序测出,然而几千个碱基能够通过三代测序测出。非常好的条件提供给了基因组的重复序列的拼接。


21世纪di一个十年里,DNA测序与生物云计算、个性化分子诊断、基因芯片、人类基因组计划等等吸引无数眼球的热门词汇息息相关。在创意新天地里,生物技术和信息技术相互融合,相互作用,相互影响。


在业外人士眼里,DNA测序足以成为“一项新技术衍生出一个新行业”的典范,非常的高科技,国内外VC和PE视之为宠儿,其在相当短旳时间内得到了非常迅猛的发展。它十年后的发展蓝图还没有人能准确描绘出来,由此可见其的发展速度的快速。所有预测相对于日新月异的DNA测序技术来说均会显得保守。


2019-09-11 16:13:34 浏览次数:74次