DNA合成流程

在体外人对双链DNA分子合成的技术，即是基因合成，不同于寡核苷酸合成：寡核苷酸是单链的，大约100nt为其所可以合成的Z长片段。基因合成却是双链DNA分子合成，50bp-12 kb是可以合成的长度范围。基因合成和其他人工方法合成基因的技术相比，不需要模板，所以基因来源不会对其起限制作用，其为获取基因的方法之一，是使用人工方法合成基因的技术。

 DNA合成流程

接收合成订单

对订单按照实际的情况进行合理的安排，根据加急-测序-内部-外部的顺序依次安排。如果是同一客户，那么将合成尽量安排在同一批次，如大合成量，高G含，链长的部分引物合成比较困难，可能需要推迟一些时间

合成

合成仪的型号不同，合成通量和合成时间都会存在差异。

氨解脱保护

结束合成以后，将载体取出，进行切割并且脱保护，长度通常不超过40bp，且需要2小时以上，链越长需要越长的时间。

纯化

HPLC纯化、脱盐纯化、PAGE纯化以及OPC纯化为目前为止常用且主要的四种纯化方式。

1、脱盐纯化

若有较高的耦合效率，较好的合成效果，短片段不存在粗品中，那么能够直接脱盐。

2、HPLC纯化

HPLC吸附基质包括离子柱和反相柱：

离子柱是按照不同长度的寡核苷酸带有的净电荷不同，洗脱n-片段通过对流动相的离子强度的缓慢增加来进行。

RP(反相柱)是按照疏水性的不同来分离的，在柱内保留的时间，疏水性更强的长片段比短片段更长。

3、OPC纯化

用低浓度的有机溶剂通过OPC柱芯对DMT寡核苷酸特殊的亲和力洗脱不带DMT的短片段，用1ml的20%乙腈洗脱用酸除去DMT后的吸附在柱芯里的DNA。

4、PAG纯化

分离的原理是利用在胶中DNA不同片段的迁移率不同，,大片段有着较大的分子，较多的电荷，也就只有较慢的迁移的速度。待等目的片段与N-片段分开后，将目的片段切下，在80摄氏度下孵育2h后脱盐。