转膜仪转膜步骤和注意事项

转膜仪是用来转印蛋白的仪器。电泳转印为转移蛋白Z常用的方法，该技术有效、迅速，并且使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。在凝胶中向印迹膜载体转印分离的蛋白质的过程，即是电泳转印法。因为此技术往膜上转印蛋白GX、快速和准确，并且能够使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。因此在转移印迹技术中得到广泛的应用。

转膜步骤(以槽式湿转为例)

1、在转移缓冲液中浸没胶平衡10分钟，留心，若是对小分子蛋白进行检测，那么就可将此步省略，因为小分子蛋白容易扩散出胶。

2、膜和滤纸6片以胶的大小为根据剪取，在转移缓冲液中放入，平衡10分钟。若使用PVDF膜，应当将其浸泡于纯甲醇中饱和3-5s（首先在甲醇中浸泡PVDF膜大约15秒，低于1分钟，之后在1×转膜缓冲液中浸泡膜，之后将2层滤纸铺在上面浸泡。

3、对转移三明治进行装配，分别为海绵、3层滤纸、胶、膜、3层滤纸以及海绵,放好每层后,气泡使用试管赶走。

4、在冰浴中放置转移槽（夹的白面对槽的红面，夹的黑面对槽的黑面）（由于电转移时会有热产生，放一块冰在槽的一边来使得温度降低），将转移缓冲液加入，将电极插上。值得留心的是是否接通电源，应当对是否正确装配三明治和电极进行检查。

5、完成转膜后，将电源切断，将杂交膜取出。

注意事项

1、由于手上的蛋白和油脂会弄张膜和对转膜效率产生影响，因此杂交膜防止直接用手碰

2、为了避免转膜不完全，应当且薄没有气泡存在于凝胶，膜和滤纸之间

3、由于膜过大和过小都会对转膜效率产生影响，因此需要使膜和滤纸的大小和凝胶完全一样得到保证。

4、泡膜:使用预冷的转移缓冲液在转膜之前浸泡海绵、胶、膜20分钟。

a、如果想要在转膜过程中不会有凝胶皱缩从而导致转移条带变形的的情况发生，那么应当将凝胶浸泡于预冷的转膜缓冲液中。

b、需用甲醇将PVDF膜浸泡，是由于PVDF膜具有疏水性。

5、转膜顺序分别为阴极碳板，海绵，三张滤纸，胶，膜，三张滤纸以及阳极碳板。

6、转膜条件：0.3/250V，转膜过程中会有大量的热产生，因此冷却尤其值得注意）（目的蛋白的大小决定了转膜时间，蛋白的分子量与转膜时间成反比）。