高速逆流色谱仪

1982年，美国国立卫生院Ito博士研制开发了一种新型的、连续GX的液液分配色谱技术--高速逆流色谱法，这种技术不同于其它色谱技术，任何固态载体其均不需要，所以可以使固相载体表面与样品发生反应而造成的样品污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响得以避免，同时其具备较高的回收率，低廉的价格，较大的进样量，较为广泛的适用范围以及快速等优点。所以其广泛应用于生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域，其在天然产物活性成分的分离纯化领域特别受到重视。

原理

在对旋转管的流体动力平衡进行研究时，偶然发现了高速逆流色谱法，其为建立于单向性流体动力平衡体系之上的一种逆流色谱分离方法。当使用缓慢的速度转动螺旋管时，螺旋管中的两相由一端分布到另一端，将其中一相当作移动相，由一端往另一端洗脱时，在螺旋管里，另一相的保留值约为一半，然而随着移动相流速的增大，这一保留量会减小，从而降低了分离效率。然而加快螺旋管的转速，会改变两相的分布，当转速达到临界范围时，沿螺旋管长度两相就会完全分开，其中首端的一段会由某一相全部占据，这一段被叫做首端相，尾端的一段由另一段全部占据，这一段被叫做尾端相。两相的这种单向性分布特征正好为高速逆流色谱所利用。在高的螺旋管转动速下，若由首端相往尾相送入，其将穿过首端相往螺旋管的尾端移动。当分离时，首先将其中的一相(固定相)注入到螺旋管内，之后将移动相由合适的一端泵入，使其载着样品在螺旋管中无限次的分配。固定相随着仪器的转速越快，保留的越多，也就会有越好的分离效果，并且使分离速度得到大大地提高，所以叫做高速逆流色谱。

1982年，美国国立卫生院Ito博士研制开发了一种新型的、连续GX的液液分配色谱技术--高速逆流色谱法，这种技术不同于其它色谱技术，任何固态载体其均不需要，所以可以使固相载体表面与样品发生反应而造成的样品污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响得以避免，同时其具备较高的回收率，低廉的价格，较大的进样量，较为广泛的适用范围以及快速等优点。所以其广泛应用于生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域，其在天然产物活性成分的分离纯化领域特别受到重视。

背景

二十世纪六十年代，一种有趣的现象起先在日本，之后在美国国家医学研究院被发现，就是在绕成螺旋形的小孔径管子里互不相溶的两相溶剂分段割据，并且使两溶剂相之间的逆向对流得以实现。在此基础上，一系列逆流色谱装置被Ito及其后来者研究并设计制造出来了。封闭型的螺旋管行星式离心分离仪为早期的意义，在对染料，蛋白质和细胞粒子进行分离时被使用。若干年以后，Ito在螺旋管柱体系中引入了流通机制，使逆流色谱相同于现代色谱，能够使连续的的洗脱、分离、检测和收集得以实现，并且使两个基本的流通体制得以建立。其中用作制备分离的DCCC以及移位腔室CCC，用作分析分离的CCC等均是基于比较简单的流体静力学平衡体制HDES开发出来的。另外一方面，基于流体动力学平衡体制HDES在离心力场作用下的分析型和半制备型分离仪器以及在重力场作用下的大制备量分离仪器被研制了出来。

应用范围

世界范围内，ZG为比较早开展逆流色谱技术研究的国家，其具有非常广泛的应用范围，例如海洋生物、及无机离子、保健品原料、食品添加剂、化妆品、生物化学、医药学、农业、环境、材料、化工、天然产物化学、有机合成、环境分析、食品、地质、生物工程以及医药等众多领域。

1982年，美国国立卫生院Ito博士研制开发了一种新型的、连续GX的液液分配色谱技术--高速逆流色谱法，这种技术不同于其它色谱技术，任何固态载体其均不需要，所以可以使固相载体表面与样品发生反应而造成的样品污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响得以避免，同时其具备较高的回收率，低廉的价格，较大的进样量，较为广泛的适用范围以及快速等优点。所以其广泛应用于生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域，其在天然产物活性成分的分离纯化领域特别受到重视。

基本配置

仪器的zhong心部分

1、平衡器

其能够对重量进行调节，使平衡器和ITO多层线圈分离柱相对于zhong心轴两边重量平衡。当处于齿轮传动装置作用下，旋转控制器的控制下，沿着zhong心轴，ITO多层线圈分离柱以及平衡器作顺时针或逆时针的行星运动，也就是说ITO多层线圈分离柱以及平衡器本身既在自转，然而与此同时，又绕zhong心轴公转，每分钟0-4000转为公转的转速范围。由线圈分离柱中从中空的zhong心轴通过，同时还将线圈的两端牵引出。一端提供给泵入液使用，另外一端将液体输出。互不相溶的两种液体在仪器工作时被需要，一相作为固定相，另外一相作为移动相。当仪器工作时，首先使用恒流泵往线圈分离柱内压入作为固定相一相的液体，之后通过进样器进样待分离的样品，Z后将移动相通过恒流泵压入，同时将zhong心部分启动运转一直到转速超过每分钟600转，在这个时候，在线圈分离柱中，两相具有相对运动之势。因为源源不断的压入移动相，使固定相的流出得以阻止。与此同时，移动相带着样品在线圈分离柱中进行无限次的分配从而分离了复杂样品。当移动相从检测器经过时，因为样品的组分不同，其产生的信号大小也会存在差异，逆流色谱图谱使用记录仪就可以获得，与此同时，移动相通过馏分收集器分步收集，就可以使复杂样品被分开的组分获得。

2、ITO多层线圈分离柱

内径大约为1.6毫米，长约

1982年，美国国立卫生院Ito博士研制开发了一种新型的、连续GX的液液分配色谱技术--高速逆流色谱法，这种技术不同于其它色谱技术，任何固态载体其均不需要，所以可以使固相载体表面与样品发生反应而造成的样品污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响得以避免，同时其具备较高的回收率，低廉的价格，较大的进样量，较为广泛的适用范围以及快速等优点。所以其广泛应用于生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域，其在天然产物活性成分的分离纯化领域特别受到重视。

技术特点

1、有较高的重现性

若样品的表面活性作用不是很强，酸碱性也很弱，就算进样多次，其也会保持非常稳定的分离过程，并且会有十分好的重现性。

2、较高的分离量以及较高的分离效率

因为有别于通常的色谱分离方式，梯度洗脱和反相洗脱可以得到实现，重复进样也能够进行，让其对于制备性分离尤其适用，产品具备较高的纯度和数量。

3、分配系数

溶剂系统的选择为同时对色谱分离过程的两相进行选择，样品成功分离的关键也取决于此，这种溶剂系统合适与否取决于样品中各组分的分配系数，所以选择溶剂系统的重要环节是分配系数的测定。目前为止，分析型HSCCC法，生物活性分配比率法，HPLC法，毛细管电泳法以及薄层色谱法均是测定分配系数的常用方法。

4、较为广泛的应用范围与良好的适应性

因为能够为无限多的溶剂系统的组成及配比，所以，就理论而言，对于分离任何极性范围内样品均适用，在对于天然化合物的分离上尤为独到。因为聚四氟乙烯管中的固定相是液体，固相载体没有必要用到，所以能够使因为使用固相载体而带来的吸附损失得以消除，尤其对于极性物质的分离非常适用。

5、简便、易掌握的操作

仪器能够相对简便地进行操作，样品的预处理有着很低的要求。

6、有较高的回收率

固相载体不需要，使因为样品在固相载体上的不可逆吸附和降解导致的损失得以消除，从理论上而言样品的回收率能够达到很高的水平。在实验过程中，仅需将分离条件

1982年，美国国立卫生院Ito博士研制开发了一种新型的、连续gao效的液液分配色谱技术--高速逆流色谱法，这种技术不同于其它色谱技术，任何固态载体其均不需要，所以可以使固相载体表面与样品发生反应而造成的样品污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响得以避免，同时其具备较高的回收率，低廉的价格，较大的进样量，较为广泛的适用范围以及快速等优点。所以其广泛应用于生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域，其在天然产物活性成分的分离纯化领域特别受到重视。

前景

这些年以来，溶剂体系有了越来越宽泛的选择范围，一些人表示流动相可以使用超临界二氧化碳，对于化合物的分离而言，其扩散性高，粘度低，无论是流体特性还是环境均相对友好，其相较于其他溶剂，优势非常的明显，也有一些人表示流动相可以使用制冷剂。又有一些人提出在高速逆流色谱分离中使用三相溶剂体系，能够非常好的分离宽极性范围的样品。到目前为止，仅在分离标准品混合物时使用三相溶剂，还没有在分离具体天然产物时使用三相溶剂。可以想象，复杂天然产物以及药物的分离若得到进一步的发展，那么它的应用前景一定非常大。

现在Z先发展起来的制备色谱技术为pH区带逆流色谱，其可以使样品提高超过10倍的负载容量。就算物质的含量非常低，其也可以高度的浓缩。其是将保留剂和洗脱剂这一对试剂加入到固定相和流动相中。在管柱内保留样品中的各组分为保留剂的作用，当含有洗脱剂的流动相通过一定流速从固定相穿过，因为酸碱反应Z终达到平衡。溶质的出峰时间取决于溶质的分配系数与标度值的差异。按照不同组分的Pka以及不一样的疏水性来使分离实现。