细胞培养箱的原理|作用|消毒灭菌

　　细胞培养箱是细胞、组织、细菌培养的一种先进仪器，能很精确地提供细胞培养需要的温度、湿度、气体环境等参数，性能稳定、响应迅速、可靠性高，且能有效防范对培养细胞的污染。

　　细胞培养箱的温度控制：

　　保持细胞培养箱内恒定的温度是维持细胞健康生长的重要因素。常规的细胞培养箱采用两种类型的加热方式：气套式加热和水套式加热。虽然这两种加热系统都是精确和可靠的，但是它们都有着各自的优点和缺点：

　　①水套式加热

　　水套式加热培养箱是通过一个独立的热水间隔间包围内部的箱体来维持温度恒定的。热水通过自然对流在箱体内循环流动，热量传递到箱体内部从而保持了温度的恒定。

　　水套式加热方式的优点：水是一种很好的绝热物质，当遇到断电的时候，水套式系统就能更可靠地长久保持培养箱内温度的准确性和稳定性(维持温度恒定的时间是气套式系统的4~5倍)。当实验环境不太稳定(如有用电限制，或者经常停电)并需要保持长时间稳定的培养条件，此时，水套式设计的培养箱就显得优点突出。

　　②气套式加热

　　气套式加热系统是通过箱体内的加热器直接对箱内气体进行加热的。气套式设计在箱门频繁开关引起的温度经常性改变的情况下，能够迅速恢复箱体内的温度稳定。培养箱内部有一个风扇，以保证箱内空气的流通和循环，此装置还有助于箱内各种参数值的迅速恢复。

　　因此，气套式与水套式相比，具有加热快，温度的恢复比水套式培养箱迅速的特点，特别有利于短期培养以及需要箱门频繁开关的培养。此外，对于使用者来说气套式设计比水套式更简单化(水套式需要对水箱进行加水、清空和清洗，并要经常监控水箱运作的情况)。

　　此外，有些类型的细胞培养箱还具备外门及辅助加热系统，这个系统能加热内门，提供给细胞良好的湿度环境，保证细胞渗透压维持平衡，且可有效防止形成冷凝水以保持培养箱内的湿度和温度。配备这种系统的细胞培养箱，适用于培养环境需要精确控制的实验。

　　细胞培养箱是细胞、组织、细菌培养的一种先进仪器，是开展免疫学、肿瘤学、遗传学及生物工程所必须的关键设备，广泛应用于微生物、农业科学、YL实验等科学研究和生产。

　　将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。

　　细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。

　　CO2既是细胞代谢产物也是细胞所需成分，主要与维持培养液的pH有直接关系。动物细胞多数需要微碱性环境，pH为7.4左右。在细胞培养过程中，随着CO2释放量的增多，培养基会变酸，因此常加入NaHCO3来调节pH。NaHCO3具有释放CO2的倾向，加入CO2可以YZ这个反应的进行。

　　细胞培养箱中CO2浓度应与培养液中NaHCO3浓度相平衡，细胞培养箱的气体环境一般是95%的空气和5%的CO2。

　　并非只有细胞培养箱才能做细胞培养，主要是细胞培养箱可以省去很多麻烦。普通的恒温培养箱，生化培养箱也可以做细胞培养。但是要时刻监视溶液中的PH值，湿度，工作量增加很多，失败概率也增大很多。所以细胞培养一般在细胞培养箱中。

　　初代消化培养法：

　　1、准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

　　2、布局:点燃酒精灯，安装吸管帽。

　　3、处理组织:把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污;如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。

　　4、剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消

　　细胞培养箱是开展免疫学、肿瘤学、遗传学及生物工程所必须的关键设备，细胞培养箱广泛应用于细胞、组织培养和某些特殊微生物的培养，常见于细胞动力学研究、哺乳动物细胞分泌物的收集、各种物理、化学因素的致癌或毒理效应、抗原的研究和生产、培养杂交瘤细胞生产抗体、体外授精(IVF)、干细胞、组织工程、药物筛选等研究领域。

　　对于细胞来说，非常理想的培养环境同样也适合这些污染物的生存，培养箱本身是不会辨别的，而细胞培养中大部分时间里细胞都是位于培养箱内，因此箱体内能否抑jun或灭菌非常关键!

　　细胞培养箱中的主要污染源：细菌、真菌(霉菌和酵母菌)、病毒、支原体、非同种细胞。

　　支原体：支原体污染后，因为它们不会使细胞死亡可以与细胞长期共存，培养基一般不发生浑浊，细胞无明显变化，外观上给人以正常感觉，实则细胞已经受到多方面潜在影响，如引起细胞变形，影响DNA合成，yi制细胞生长等，往往被大多数实验者忽视。

　　细菌：细菌污染后，培养基1-2天就会变色，对细胞生长影响明显，应迅速将污染细胞与其它细胞系隔离，灭菌后丢弃，还要用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台。

　　病毒：由于病毒寄生生存，爆发后尽快和正常细胞隔离，丢弃处理，相对来说容易处理，对操作者威胁较大;尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。

　　真菌(霉菌和酵母菌)：真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了;目前没有好的yi制方法，包括现在常用的两性霉素，一旦污染容易反复爆发，尤其孢子很难杀灭。

　　非同种细胞：即细胞交叉污染，由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。目前，世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效。

细胞培养指的是在体外模拟体内的环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），让它生存、生长、繁殖并且能够维持主要的结构和功能的一种方法。细胞培养在生物学中又叫做细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养技术可以通过一个细胞培养成为大量的单细胞或极少分化的多细胞，细胞培养技术是细胞生物学研究方法中及其重要和常见的技术，由细胞培养不仅能够获取大量细胞，还能够借此研究细胞其他的相关知识。

微生物细胞培养

微生物一般都是单细胞生物，生存条件比较简单。因此相较于动植物细胞的培养，微生物细胞的培养的条件更加的简单。其中好氧微生物比厌氧微生物培养要容易，因为好氧微生物只需要通过不断搅拌提供无菌氧气即可，而厌氧微生物必须要保持二氧化碳等非氧的惰性气体浓度。与动植物细胞相比，微生物的培养条件要求不是那么严格。麦芽汁、酵母膏蛋白胨、玉米浆等都是相当好的微生物天然培养基。一些特殊微生物的营养条件要求需要在天然培养基的基础上额外添加。

动物细胞培养

与植物细胞培养和微生物细胞细胞培养相比，动物细胞培养是当中Z麻烦的。它需要一些特殊的条件：

⑴血清：

动物细动物细胞离体培养需要要到血清，通常使用小牛血清。血清相当于动物细胞离体培养的天然营养液，为动物细胞培养提供像矿物质微量元素、脂肪和激素的生长必需因子。

⑵支持物：

很多动物细胞有贴壁生长的习惯。所以离体培养常用的支持物如玻璃，塑料。

⑶气体调节：

在细胞培养过程中，需要不断调整二氧化碳和氧气的比例以保持所需要的气体条件。

植物细胞培养

⑴光照：

植物细胞离体培养的营养绝大多数由培养来提供，所有其对光照的条件不是很苛刻。然而光照既和细胞分化相关又和光合作用相关。因此对于

以获得植株为目的的早期植物细胞培养过程中，光照条件尤其重要。以植物细胞离体培养方式获得营养，像药物的过程，植物细胞很多都是在反应器中悬浮培养。

⑵激素：

生长素能够促进细胞