CLL患者T细胞BCL-2的作用机制研究

研究背景

慢性淋巴细胞白血病（Chronic lymphocytic leukemia CLL）是一类以成熟小B淋巴细胞在外周血、骨 髓及淋巴组织中克隆性增殖为主要特征的成熟B细胞淋巴瘤，好发于中老年人群。仍是一种难以治愈的恶性疾病，其具体的发病机制亟待解决。已有文献报道，CLL的发生 发展与T细胞数量和功能的严重缺陷有关，不仅导致T细胞抗肿瘤活性降低，同时增加感染和自身免疫性疾病的发生几率。然而并非所有CLL患者都存在T细胞功能障碍，因此，发现导致CLL患者T细胞功能缺陷的标志物对于CLL的治 疗、预后判断和临床转归至关重要。

关于CLL患者B细胞中BCL-2（B-cell lymphoma 2，B细胞淋巴瘤）表达增 高的研究较多，但甚少有研究关注到肿瘤微环境中T细胞BCL-2表达。本文的研究者们旨在探讨BCL-2蛋白在CLL患者T细胞中的表达特点，证实了CLL患者T细胞中的BCL-2表达在TEM中的作用机制。

实验思路

一、研究BCL-2蛋白在CLL患者T细胞上中的表达情况

二、研究BCL-2+T细胞在CLL肿瘤微环境中的作用机制

实验方法

首先，研究者利用FCM研究了CLL患者（266例初诊）和健康人（30例）外周血T细胞中BCL-2蛋白的表达，分析BCL-2表达与患者的临床特征、细胞遗传学、分子生物学异常等预后指标相关性。同时通过scRNA-seq研究了6例CLL和2例对照样本中BCL2基因的表达情况。

研究者采用我们Beckman Coulter Cytobank分析软件将CLL和健康对照各10例FCM数据整合后降维分析形成viSNE图（一种基于t-SNE算法的高维单细胞数据可视化工具）进行分析。FCM结果发现：

81.6%（217/266）的CLL患者T细胞中存在BCL-2表达，且BCL-2表达的平均阳性百分比和平均荧光强度明显高于健康对照组，差异具有统计学意义。

scRNA-seq对CLL患者CD4+、CD8+T细胞BCL2表达分析结果发现：BCL-2阳性T细胞中Treg细胞数量明显高于BCL-2阴性，Th1细胞表达减少；BCL-2阳性和阴性CD8+T细胞之间，与耗竭、PRF1、GZMB相关基因表达存在差异。

接着，研究者采用FCM的方法，分别考察了：

CLL患者BCL-2+CD4+T细胞群细胞因子表达谱的变化情况

结果发现：相较于BCL-2-T细胞，BCL-2+T细胞中Th1细胞比例显著降低（P<0.05）；而Th2、Th17、Th22和Tfh细胞比例显著升高（P<0.05）；T细胞中BCL-2的表达与Treg细胞存在相关性，表现为BCL-2+Treg细胞阳性百分比（Treg/CD4+细胞总数）和绝 对数明显高于BCL-2-Treg细胞（P<0.01）。

CLL患者BCL-2+Treg细胞抑 制性细胞因子分泌研究

结果发现：BCL-2+Treg细胞胞内IL-10的阳性比例和MFI以及TGF-β的阳性比例均显著高于BCL-2-Treg亚群。同时发现，与BCL-2-Treg细胞相比，BCL-2+Treg细胞具有分泌更多的抑 制性细胞因子IL-35和TGF-β的趋势。

CLL患者BCL-2+CD8+T细胞功能变化情况

结果发现：CD8+BCL-2+T细胞中重度耗竭（PD-1+Tim-3+）细胞的比例和MFI明显高于CD8+BCL-2-T细胞组（P<0.05）。此外，本研究也发现BCL-2表达增加与T细胞毒性蛋白颗粒酶B表达减少明显相关，与CD8+BCL-2-T细胞群相比，CD8+BCL-2+T细胞群颗粒酶B平均阳性百分比减低，而穿孔素表达差异无统计学意义，但CD8+BCL-2+T细胞群中颗粒酶B和穿孔素MFI水平显著高于CD8+BCL-2-T细胞群。

CLL患者BCL-2+T细胞分化情况

结果发现：BCL-2+T细胞群中Tn细胞比例高于BCL-2-T细胞群，而效应记忆T细胞（Tem，CD45RA-CD62L-）和中 央记忆T细胞（Tcm，CD45RA-CD62L+）比例低于BCL-2-T细胞群（P<0.05），效应T细胞（Teff，CD45RA+CD62L-）变化不明显。

CLL患者BCL-2+T细胞治 疗前后变化情况

结果发现：维奈克拉治 疗后CD4+BCL-2+T和CD8+BCL-2+T细胞的百分比减低（P<0.05），且CD4+T细胞中Treg比例以及CD8+T细胞中PD1+Tim-3+比例在治 疗后也明显减低，差异具有统计学意义（P<0.05）。

这一结果表明，BCL-2抑 制剂治 疗后，患者外周血T细胞中BCL-2表达情况可以作为临床治 疗有效和抑 制性TME获得逆转的潜在指标。

结论

综上所述，本文的研究者们首次发现CLL患者中BCL-2+T细胞表达上调，BCL-2+T细胞能增强Treg表达和促进CTL细胞衰竭，证明BCL-2+T细胞群在介导CLL细胞免疫逃逸和促进CLL的发生 发展中具有重要作用。CLL患者采用BCL-2抑 制剂维奈克拉治 疗后，T细胞功能获得有效逆转。