天生C位，玩转离心 | 高效细胞收获与蛋白纯化指南

蛋白纯化的首要步骤是从细菌、昆虫或哺乳动物的细胞、组织等培养物中分离出目标蛋白。细胞收获步骤通常使用大容量低速离心，连续流离心，微孔过滤，或深层过滤技术收集培养基中的细胞。

继细胞沉淀和裂解后，蛋白纯化的第二个关键步骤是将蛋白与非蛋白污染物和细胞碎片进行有效分离。此步骤需使用高速转头。相对离心力需达到约25,000 x g。裂解液澄清过程中，目标蛋白或蛋白复合物越小，转速就越快，无需担心蛋白随亚细胞碎片沉淀。

粗提纯步骤通常使用共沉淀搭配离心方法，或层析法进行提纯，从批量提取物中回收目标蛋白。

目标蛋白的初级纯化通常基于亲和、离子交换、疏水相互作用和尺寸排阻等色谱原理进行分离提纯。实践证明，96孔板高通量试剂盒非常适用于此类色谱条件的筛选，而微量和微型离心柱法可快速纯化少量重组蛋白。

高分辨率密度梯度离心法可用于亚细胞分离，从而高效分离线粒体或细胞核等特定细胞器中的目标蛋白。密度梯度离心通常需采用超速离心分离技术，离心时先将样品置于一个由惰性梯度材料形成的密度梯度液体柱中，离心后被分离组分以区带层分布于梯度柱中。

对于任何生物化学或生物物理应用而言，选择适当的蛋白纯化缓冲液和浓缩工具至关重要。多种带滤膜离心柱都可用于缓冲液置换和蛋白浓缩，如1K 至100K 的超滤浓缩离心管。

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