吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色试剂盒说明书

产品简介：

细胞凋亡(Apoptosis)的检测方法有形态学、生物化学、DNA片段化检测方法以及TUNEL等标记片段化DNA方法，但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑，使用显微镜进行的形态学观察也是很重要的。细胞死亡的检测可以通过荧光色素染色区分活细胞、死细胞，测定细胞代谢活性和形态学观察。这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的，因而不一定反映实际情况。MTT法是测定线粒体中特有酶的活性，反映细胞数目的变化，其结果不细胞死亡的数目未必完全一致。

吖啶橙(AcridineOrange,AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA,属于异染性荧光染料，AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO不核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO不DNA的结合，其荧光射峰为530nm，激后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO不单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO不RNA的结合，其荧光射峰为640nm，激后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此，吖啶橙嵌合到双链DNA分子中显绿色，不DNA单链或RNA结合时橙红色荧光。溴化乙锭(EthidiumBromide,EB)嵌合到双链DNA或RNA的碱基对中，无碱基特异性，红色荧光。吖啶橙可透过活细胞膜，EB不能通过不活细胞膜具有相同通透性的细胞膜。

产品

规格

储存

200ul

4℃避光

200ul

RT

50ml

4℃避光

使用说明书

一份

自备材料：

1、荧光显微镜

2、PBS

3、细胞计数板

4、载玻片、盖玻片

操作步骤(仅供参考)：

1、AO/EB工作液的配制：取试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)，按照试剂(A):试剂(B):试剂(C)=1:1:8的比例稀释成AO/EB工作液。

2、每份细胞样品中加入AO/EB工作液2μl，混合均匀。

3、低速离心：500g离心5min，弃上清。

4、用AO/EBDilutionBuffer重悬细胞，细胞计数，将细胞密度调整为0.5~5×106个/ml。

5、每25μl细胞悬液中，加入1μlAO/EB工作液，充分混匀。

6、取洁净载玻片，滴加上5μl细胞悬液，轻轻盖上盖玻片。

7、在荧光显微镜B域进行观察。

染色结果：

活细胞

绿色荧光

死细胞

橙色荧光

注意事项：

1、用能通过活细胞膜不DNA结合后蓝色荧光的Hoechist33342和只能通过死细胞不DNA结合后红色荧光的碘化吡啶(propidiumiodide，PI)对细胞进行双染的方法也比较常用。

2、如有低温离心机进行离心效果更佳。

3、操作过程中应注意减少试剂(A)、试剂(B)暴露于强光下的时间。

4、EBsolution有一定毒性，请小心操作。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

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