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小鼠溶血卵磷脂酰基转移酶4(LPCAT4)检测试剂盒实验原理,小鼠溶血卵磷脂酰基转移酶4(LPCAT4)检测试剂盒实验方法,小鼠溶血卵磷脂酰基转移酶4(LPCAT4)检测试剂盒实验步骤。
小鼠溶血卵磷脂酰基转移酶4(LPCAT4)检测试剂盒:注意事项
※当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
※洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
※一次加样时间Z好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
※请每次测定的同时做标准曲线,Z好做复孔。
※如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请Z后乘以稀释倍数。
※在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。
※底物请避光保存。
※不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
小鼠溶血卵磷脂酰基转移酶4(LPCAT4)检测试剂盒原理:戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。
小鼠溶血卵磷脂酰基转移酶4(LPCAT4)检测试剂盒标记步骤:
(1)称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中,于室温静置。
(2)反应后的酶溶液经SephadexG-25层析柱,用生理盐水洗脱。流速控制在1ml/1分钟,收集棕色流出液。如体积大于5ml,则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中,缓慢搅拌。
(3)将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml,搅拌下逐滴加入酶溶液中。
(4)用1MPH9.5碳酸缓冲液0.25ml,继续搅拌3?小时。)
(5)加0.2M赖氨酸0.25ml,混匀后,置室温2小时。
(6)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵,置4℃1小时。
(7)3000rpm离心半小时,弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次,Z后沉淀物溶于少量0.15MPH7.4的PBS中。
(8)将上述溶液装入透析袋中,对0.15MPH7.4的PB缓冲盐水透析,去除铵离子后(用萘氏试剂检测),10,000rpm离心30分钟去除沉淀,上清液即为酶结合物,分装后,冰冻保存。yb-E10114人可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒HumansolubleE-selectin(sE-selectin)ELISAkit说明书
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- 2004-09-16 09:23:05
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