小鼠神经干细胞培养

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【导读】复苏：将小鼠神经干细胞冻存管从液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁，防止污染。将冻存管内细胞悬液转移至含3-4ml小鼠神经...

复苏：

将小鼠神经干细胞冻存管从液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁，防止污染。将冻存管内细胞悬液转移至含3-4ml小鼠神经干细胞完全培养液的15ml离心管内，以1000rpm，离心5min。离心后将上清液吸除，另加入新鲜的小鼠神经干细胞完全培养液2ml，吹打悬浮。轻轻吹打，制成单细胞悬液，尽量避免气泡。按照小鼠神经干细胞说明书中建议复苏培养体系转移至一个T25培养瓶中培养，加入培养液6ml。放入37℃培养箱内培养。复苏第二天观察，如死细胞较多，更换新鲜的小鼠神经干细胞完全培养液，可以使细胞生长的更好。

传代：

待细胞长到80%满时进行传代，一般2-3天，具体视细胞生长情况。吸除废液。用PBS（不含钙镁离子）轻轻冲洗一遍。加入1-2ml的0.05%胰酶（含EDTA）至培养瓶，轻轻晃动，使胰酶覆盖底面，置于37℃培养箱内消化细胞。在显微镜下观察，直至细胞层全部脱落（一般需要5-15min）。加2ml小鼠神经干细胞完全培养液终止消化。1000rpm离心5min，去上清，加入小鼠神经干细胞完全培养液2ml。多次轻轻吹打细胞，制成单细胞悬液。按照1:4-1:10的比例进行传代。放入37℃培养箱内培养。

冻存：

按传代的方法将细胞消化下来，制成细胞悬液。以1000rpm，离心5min，弃上清，逐滴加入已经预冷的冻存液，悬浮细胞。按每支冻存管内加入500ml细胞悬液分装到冻存管内，标记细胞名称、代数、冻存日期等基本信息。将冻存管置于程序降温盒内，-80℃过一夜，转入液氮。

冻存液配方：
小鼠神经干细胞完全培养液90%，DMSO10%

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2004-10-15 09:23:03

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