仪器网

欢迎您: 免费注册 仪器双拼网址:www.yiqi.com
首页-资讯-资料-产品-求购-招标-品牌-展会-行业应用-社区-供应商手机版
官方微信
仪器网资讯中心
仪器网/ 资讯中心/人胚胎干细胞(hES)培养方法
最新企业新闻
最新产品文章
热门标签
上海长方光学仪器有限公司

人胚胎干细胞(hES)培养方法

来源:内容来源于网络 浏览量:549次
【导读】人胚胎干细胞(hES)培养MEF细胞铺制:在T25培养瓶中加入5%Matrigel,摇匀后覆盖底面即可,于37℃细胞培养箱中至少放置30min以上。吸除Matrigel,加入事先水...

人胚胎干细胞(hES)培养

MEF细胞铺制:

在T25培养瓶中加入5%Matrigel,摇匀后覆盖底面即可,于37℃细胞培养箱中至少放置30min以上。吸除Matrigel,加入事先水浴加热至37℃的MEF完全培养液。一般地,一个T25培养瓶中加入5mlMEF完全培养液。按实验需要复苏MEF若干支。将冻存管从液氮中取出,置于37℃水浴中使之迅速融解,取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁,防止污染。将冻存管内细胞悬液转移至含2mlMEF完全培养液的15ml离心管内,以1000rpm,离心5min,离心后将上清液吸除,另加入新鲜的MEF完全培养液1ml,重悬后按照一个T25培养瓶铺1′106的MEF细胞,平均加入到T25培养瓶,轻轻摇匀后置于37℃细胞培养箱。48h以后可以传入人胚胎干细胞。复苏或传代hES细胞前,将T25培养瓶中的MEF完全培养液吸除,加入2mlhES完全培养液轻轻冲洗一遍后吸除,加入新鲜的hES完全培养液待用。

复苏:

将hES细胞冻存管从液氮中取出,置于37℃水浴中使之迅速融解,取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁,防止污染。将冻存管内细胞悬液转移至含3-4mlhES完全培养液的15ml离心管内,以1000rpm,离心5min。离心后将上清液吸除,另加入新鲜的hES完全培养液2-3ml,吹打一次使细胞悬浮。转移至1个已经铺好MEF细胞的T25培养瓶中培养。复苏第二天不换液,第三天起每天更换hES细胞完全培养液。

注意:复苏后48小时换液,期间Z好不要挪动细胞。hES复苏后大约4-5天才开始有克隆出现。


传代:

一般在复苏后第7-10天传代,正常传代为7天一次。吸除废液。用PBS(不含钙镁离子)轻轻冲洗一遍。加入4-5ml的1mg/ml的Collagenase-typeIV至培养瓶,轻轻晃动,使之覆盖底面,置于37℃培养箱内消化细胞。在显微镜下观察,直至克隆边缘大部分脱落(一般需要30-60min)。用10ml移液管轻轻吹打,将克隆吹下,细胞悬液转移至15ml离心管中,放置一会,待克隆自然沉降后将上层Collagenase-typeIV吸除,加入hES完全培养液3ml,放置一会,待克隆自然沉降后将上层培养液吸除。加入的hES完全培养液3ml,用10ml移液管吹打2-3次,细胞自然沉降,将上层吹打的过小的克隆及培养液吸除,加入hES完全培养液3ml,悬浮细胞,按照1:4的比例进行传代。放入37℃培养箱内培养。第二天不换液,第三天起每天换液,换液前显微镜下将分化的克隆挑除。

注意:复苏后48小时换液,期间Z好不要挪动细胞。hES复苏后大概4-5天才开始有克隆出现。


冻存:

按传代的方法将细胞消化下来,制成细胞悬液。细胞自然沉降,吸除上层培养液,逐滴加入已经预冷的冻存液,轻轻悬浮细胞。按每支冻存管内加入500ml细胞悬液分装到冻存管内,标记细胞名称、代数、冻存日期等基本信息。将冻存管置于程序降温盒内,-80℃过一夜,转入液氮。

冻存液配方:
hES完全培养液60%,ES级FBS30%,DMSO10%


仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。

相关热词:

等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜


2004-10-15 09:23:03
标签:
随时了解更多仪器资讯,求购、招标、中标信息实时更新,厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网(yiqi.com)。扫一扫关注仪器网官方微信,随时随地查看仪器用户采购、招标需求!