- 保护地球,不止一小时
- 瑶安 | 经济损失19.86亿,多人死亡!春季危化品安全风险请做好防范!
- 展会回顾 | 中国(南京)国际科教技术及装备博览会
- 直播预告丨《食品微生物检测技术的进展以及应用》研讨会
- 提升工作效率的金相切割机,不容错过!
- 【直播预告】ADC药物的作用机制和表征技术探讨
- 【国产新品】匠心传承,科技赋能——Allegra C-34R台式高速冷冻离心机震撼上市!
- 传承不息,焕新升级 | 德国元素TOC总有机碳分析仪选型方案
- Langmuir和Langmuir- blodgett膜的过去、现在和未来
- 瑶安 | 3死1伤!监控画面曝光!主要负责人、副总经理等被追刑责!
- 低噪声GHz飞秒激光器——提供卓越的可靠性、超低位相与振幅噪声
- 总磷和正磷酸盐的区别与联系
- 按键式电子分析天平,量程0-200g
- 来源:内容来源于网络 浏览量:549次
- 【导读】人胚胎干细胞(hES)培养MEF细胞铺制:在T25培养瓶中加入5%Matrigel,摇匀后覆盖底面即可,于37℃细胞培养箱中至少放置30min以上。吸除Matrigel,加入事先水...
人胚胎干细胞(hES)培养
MEF细胞铺制:
在T25培养瓶中加入5%Matrigel,摇匀后覆盖底面即可,于37℃细胞培养箱中至少放置30min以上。吸除Matrigel,加入事先水浴加热至37℃的MEF完全培养液。一般地,一个T25培养瓶中加入5mlMEF完全培养液。按实验需要复苏MEF若干支。将冻存管从液氮中取出,置于37℃水浴中使之迅速融解,取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁,防止污染。将冻存管内细胞悬液转移至含2mlMEF完全培养液的15ml离心管内,以1000rpm,离心5min,离心后将上清液吸除,另加入新鲜的MEF完全培养液1ml,重悬后按照一个T25培养瓶铺1′106的MEF细胞,平均加入到T25培养瓶,轻轻摇匀后置于37℃细胞培养箱。48h以后可以传入人胚胎干细胞。复苏或传代hES细胞前,将T25培养瓶中的MEF完全培养液吸除,加入2mlhES完全培养液轻轻冲洗一遍后吸除,加入新鲜的hES完全培养液待用。复苏:
将hES细胞冻存管从液氮中取出,置于37℃水浴中使之迅速融解,取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁,防止污染。将冻存管内细胞悬液转移至含3-4mlhES完全培养液的15ml离心管内,以1000rpm,离心5min。离心后将上清液吸除,另加入新鲜的hES完全培养液2-3ml,吹打一次使细胞悬浮。转移至1个已经铺好MEF细胞的T25培养瓶中培养。复苏第二天不换液,第三天起每天更换hES细胞完全培养液。注意:复苏后48小时换液,期间Z好不要挪动细胞。hES复苏后大约4-5天才开始有克隆出现。
传代:
一般在复苏后第7-10天传代,正常传代为7天一次。吸除废液。用PBS(不含钙镁离子)轻轻冲洗一遍。加入4-5ml的1mg/ml的Collagenase-typeIV至培养瓶,轻轻晃动,使之覆盖底面,置于37℃培养箱内消化细胞。在显微镜下观察,直至克隆边缘大部分脱落(一般需要30-60min)。用10ml移液管轻轻吹打,将克隆吹下,细胞悬液转移至15ml离心管中,放置一会,待克隆自然沉降后将上层Collagenase-typeIV吸除,加入hES完全培养液3ml,放置一会,待克隆自然沉降后将上层培养液吸除。加入的hES完全培养液3ml,用10ml移液管吹打2-3次,细胞自然沉降,将上层吹打的过小的克隆及培养液吸除,加入hES完全培养液3ml,悬浮细胞,按照1:4的比例进行传代。放入37℃培养箱内培养。第二天不换液,第三天起每天换液,换液前显微镜下将分化的克隆挑除。注意:复苏后48小时换液,期间Z好不要挪动细胞。hES复苏后大概4-5天才开始有克隆出现。
冻存:
按传代的方法将细胞消化下来,制成细胞悬液。细胞自然沉降,吸除上层培养液,逐滴加入已经预冷的冻存液,轻轻悬浮细胞。按每支冻存管内加入500ml细胞悬液分装到冻存管内,标记细胞名称、代数、冻存日期等基本信息。将冻存管置于程序降温盒内,-80℃过一夜,转入液氮。冻存液配方:
hES完全培养液60%,ES级FBS30%,DMSO10%仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
相关热词:
等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。
- 2004-10-15 09:23:03
- 标签:
- 收藏(0) 赞(0) 踩(0)
- 随时了解更多仪器资讯,求购、招标、中标信息实时更新,厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网(yiqi.com)。扫一扫关注仪器网官方微信,随时随地查看仪器用户采购、招标需求!
-
聚乳酸制作的方法流程 聚乳酸 生产是以乳酸为原料,传统的乳酸发酵大多用淀粉质2004-07-23 16:27:07
聚乳酸制作的方法流程 聚乳酸生产是以乳酸为原料,传统的乳酸发酵大多用淀粉质原料,目前美、法、日等国
-
进入胚胎培养室将严格通过风淋室消毒2006-06-08 13:33:56
进入胚胎培养室将严格通过风淋室消毒 ,我司小记者有幸采访我国某胚胎培养室杨主任,在
-
高性能干细胞标志物抗体的上市2004-11-29 09:23:26
干细胞的研究正在快速扩展和推进人们对细胞发育的基本特性的了解以及干细胞在细胞治疗中的潜在应用。干细胞和祖细胞
-
神经再生胶原支架+干细胞,ZL脊髓损伤新希望!2004-07-12 15:05:27
神经再生胶原支架+干细胞,治疗脊髓损伤新希望!
-
浅析诱导性多能干细胞安全性2004-07-12 15:05:27
浅析诱导性多能干细胞安全性
-
干细胞因子受体(SCFR)重组蛋白2004-07-12 15:05:27
干细胞因子受体(SCFR)重组蛋白
-
促进结肠癌生长的重要癌症干细胞群体2004-07-12 15:05:27
促进结肠癌生长的重要癌症干细胞群体
-
科学家发现脑癌干细胞的致命弱点2004-07-12 15:05:27
科学家发现脑癌干细胞的致命弱点
-
干细胞与再生医学2004-07-13 09:31:27
多能干细胞(PSCs)具有发育的多潜能性,可以分化为机体各种细胞类型,是再生医学领域进行细胞替代
-
STAP细胞或为胚胎干细胞2004-07-16 10:28:52
虽然一个长时间运行的干细胞研究惨败,但日本理化学研究所(RIKEN)另一个调查委员会近日在东京发布
人胚胎干细胞(hES)培养方法
-
您可能感兴趣
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi