MEF P3细胞基本培养方法

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【导读】MEFP3细胞的基本培养方法MEF细胞铺制：一.作为【小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS细胞】用饲养层时的使用方法：在T25培养瓶中加入0.2%明胶，摇匀后覆盖底面即可，于37℃细胞培养箱...

MEFP3细胞的基本培养方法

MEF细胞铺制：

一.作为【小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS细胞】用饲养层时的使用方法：

在T25培养瓶中加入0.2%明胶，摇匀后覆盖底面即可，于37℃细胞培养箱中至少放置15min以上。吸除0.2%明胶，加入事先水浴加热至37℃的MEF完全培养液。一般地，一个T25培养瓶中约加入5mlMEF完全培养液。按实验需要：mES使用KM-rP3MEF；小鼠iPS使用ICR-rP3MEF或都使用CF-1-rP3MEF，复苏MEF细胞若干支。将冻存管从液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁，防止污染。将冻存管内细胞悬液转移至含2mlMEF完全培养液的15ml离心管内，以1000rpm，离心5min，离心后将上清液吸除，按照MEF细胞说明书上建议的复苏培养体系，另加入新鲜的MEF完全培养液2ml，重悬后平均加入到T25培养瓶中，轻轻摇匀后置于37℃细胞培养箱培养。24h以后可以传入小鼠胚胎干细胞或小鼠iPS细胞。

二.作为【人胚胎干细胞】用饲养层时的使用方法：

在T25培养瓶中加入5%Matrigel，摇匀后覆盖底面即可，于37℃细胞培养箱至少放置30min以上。吸除Matrigel，加入事先水浴加热至37℃的MEF完全培养液。一般地，一个T25培养瓶中加入5mlMEF完全培养液。按实验需要复苏CF-1-rP3MEF若干支。将冻存管从液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁，防止污染。将冻存管内细胞悬液转移至含2mlMEF完全培养液的15ml离心管内，以1000rpm，离心5min，离心后将上清液吸除，按照MEF细胞说明书上建议的复苏培养体系，另加入新鲜的MEF完全培养液2ml，重悬后平均加入到T25培养瓶中，轻轻摇匀后置于37℃细胞培养箱培养。24h以后可以传入人胚胎干细胞。

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2004-10-15 09:23:03

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