- 徕卡手术显微镜,助力国家医疗发展
- 【CSCB 2024年会福州】徕卡带你“云”逛展台,更有现场新品发布会与您分享显微成像技术前沿!
- 徕卡显微系统参展中国病理年会
- 全力支持国家以旧换新政策 | 徕卡显微助力工业制造业高质量发展
- 奥思德仪器积极响应国家政策,重磅推出超纯水机换新活动
- 欧尔赛斯全球展览第3站 | 武汉第12届华中科教仪器与技术装备展览会圆满落幕
- 2024华中科教装备展 | 福立仪器携新品赋能科教创新
- 实验室清洗机更新选型指南
- 加速、赋能组织成像研究 | THUNDER高分辨率组织成像系统
- 类器官厚样本成像,徕卡共聚焦系统解决方案第一弹
- 解密生活饮用水中的铝含量:石墨炉原子吸收法的应用
- 小“珀”图 | 一秒定输赢,揭秘F1赛车中的分析技术应用
- 焕新升级,科研赋能
- 来源:内容来源于网络 浏览量:1059次
- 【导读】实验原理测定蛋白质的定量方法有很多,目前常用的有凯氏定氮法;比色法主要包括双缩脲法、Folin-酚试剂法及染料结合法;紫外分光光度法等双缩脲(Biuret)法:在碱性溶液中,双缩脲...
实验原理
测定蛋白质的定量方法有很多,目前常用的有凯氏定氮法;比色法主要包括双缩脲法、Folin-酚试剂法及染料结合法;紫外分光光度法等
双缩脲(Biuret)法:在碱性溶液中,双缩脲(H2NCONHCONH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物,这一反应称双缩脲反应。凡分子中含二个或二个以上酰胺基(CONH2),或与此相似的基团[如CH2NH2,CSNH2,C(NH)NH2]的任何化合物,无论这类基团直接相连还是通过一个碳或氮原子间接相连,均可发生上述反应。蛋白质分子含有众多肽键(CONH),可发生双缩脲反应,且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量成正比,可用比色法测定蛋白含量。与同样处理的蛋白标准液比较,经计算或查标准曲线即可求出血清总蛋白质含量。
实验试剂
1.6mol/L氢氧化钠溶液
称取氢氧化钠(NaOH,优级纯)240g,用新鲜蒸馏水配制成1L,置室温贮存在密封的聚乙烯瓶里。
2.双缩脲试剂
称取未失结晶水的硫酸铜(CuSQ5H20)3.0g,溶于500m1新鲜蒸馏水中,加酒石酸钾钠(NaKC4H4O6.4H2O)9.0g,碘化钾(KI)5.0g,待安全
溶解后,加入6mol/L氢氧化钠溶液100ml,Z后加蒸馏水至1L。室温贮存在密闭的聚乙烯瓶里,约稳定6个月。
3.蛋白标准液
可用商品血清蛋白标准液或定值质控血清为标准。亦可收集混合新鲜血清,用凯氏定氮法标定后,加叠氮钠防腐(叠氮钠的终浓0.5~1.0g/L),冰冻
保存。
实验设备
恒温水浴箱、722(721)分光光度计、吸管、试管、坐标纸
实验步骤
1.配制20g/L蛋白标准液如蛋白标准液浓度为70g/L,则取此液2m1,加入新鲜蒸馏水5ml,混匀即成。
2.按表操作
加入物(ml)空白管12345测定管
20g/L蛋白标准液~0.10.20.30.40.5~
蒸馏水0.50.40.30.20.1~0.4
待测样品液体~~~~~~0.1
双缩脲试剂3.03.03.03.03.03.03.0
相当血液蛋白质(g/L)~20406080100
混匀,置37℃水浴10min(或25℃30min),用540nm波长比色,以空白管调零,读取各管吸光度。
3.标准曲线绘制
15为标准曲线管,测得吸光度后,以吸光度为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。
4.实验结果
根据测定管吸光度,从标准曲线查找相对应的总蛋白浓度。
注意事项
1.双缩脲试剂中,加入酒石酸钾钠,Cu2形成稳定的络合铜离子,以防止CuSO45H20不稳定形成Cu(OH)2沉淀。酒石酸钾钠与CuSO45H20之比
不低于3:1,加入KI作为抗氧化试剂。
2.双缩脲试剂要封闭贮存.防止吸收空气中的二氧化碳。
3.本法各种蛋白质的显色程度基本相同,重复性好,几乎不受温度影响,唯yi缺点是灵敏度较低。
4.黄疸血清.严重溶血对本法有明显干扰。5.本法绘制的标准曲线是一条通过原点的直线,在100g/L浓度之内呈良好的线性关系。
上海嘉鹏科技有限公司专业生产:紫外分析仪、三用紫外分析仪、暗箱式紫外分析仪、暗箱三用紫外分析仪、暗箱紫外分析仪、手提式紫外分析仪、三用紫外分析仪暗箱式、紫外检测仪、部分收集器、恒流泵、蠕动泵、凝胶成像系统、凝胶成像分析系统、化学发光成像分析系统、光化学反应仪、旋涡混合器、漩涡混合器、玻璃层析柱、梯度混合器、梯度混合仪、核酸蛋白检测仪、玻璃层析柱、荧光增白剂测定仪、馏分收集器、切胶仪、蓝光切胶仪、层析系统等产品。欢迎来电咨询。
仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
相关热词:
等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。
- 2004-10-16 09:23:05
- 标签:
- 收藏(0) 赞(0) 踩(0)
- 随时了解更多仪器资讯,求购、招标、中标信息实时更新,厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网(yiqi.com)。扫一扫关注仪器网官方微信,随时随地查看仪器用户采购、招标需求!
-
哈纳氨氮浓度测定仪技术指标介绍2004-07-06 08:51:50
氨氮主要来源于动、植物中蛋白质的微生物分解产物,由于其含有毒性,通常在水产养殖业需进行氨氮检测,河水
-
紫外分光光度法测定蛋白质含量 1.1 仪器与试剂:2004-07-09 09:55:21
摘要: 考马斯亮兰G250与蛋白质结合,在0-1000ug/ml范围内,于波长595nm处的吸光度与蛋白质含
-
如何用考马斯亮蓝染色法 (Bradford法)测定蛋白质含量2004-09-07 09:23:12
目的和要求掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理和方法。学习分光光度计的原理及使用法。原理1976年Bradf
-
氨基酸自动分析仪测定蛋白质中氨基酸2006-04-24 17:14:54
氨基酸自动分析仪测定蛋白质中氨基酸采用经典的阳离子交换色谱分离、茚三酮柱后衍生法,对蛋白质水解液及各种游
-
考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的原理、步骤及注意事项2004-08-14 09:23:05
关键词:紫外分光光度计;蛋白质浓度;美析仪器www.macylab。。com; UV-1100
-
定氮仪测定蛋白质含量时注意事项2004-08-17 09:23:03
衡量食品的营养成分,一般是通过测定食品中蛋白质、维生素、微量元素等的含量,而又以蛋白质为重。蛋白质是人体细胞
-
紫外分光光度法测定蛋白质含量2004-08-27 09:23:05
一、实验原理由于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,因此蛋白质具有吸收紫外线的性质,吸收高峰在
-
考马斯亮蓝染色测定蛋白质含量2004-08-27 09:23:05
一、实验原理考马斯亮蓝(CoomassieBrilliantBlue)测定蛋白含量存在着两种不同颜色形式,红
-
Folin-酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质含量2004-08-27 09:23:05
一、实验原理蛋白质含有两个以上的肽键(CONH),因此有双缩脲反应,在碱性溶液中,能与CU2+形成络合物。F
-
微量凯氏定氮法测定蛋白质总含量2004-08-27 09:23:05
一、实验原理天然有机物(如蛋白质和氨基酸等化合物)的总氮量通常用微量凯氏定氮法(micro-kjeldahl
蛋白质浓度测定(双缩脲法)实验介绍
-
您可能感兴趣
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi