- 第61届高博会圆满落幕,“雷磁”赋能高校仪器更新
- 热烈祝贺低场核磁共振技术发展与应用论坛在苏圆满召开!【内附会议报告视频】
- 五班同开 用户极致体验 | 纽迈2024年第一届核磁共振应用培训班顺利开班!
- 展会邀请|尔迪仪器邀您参加第23届中国国际(西部)光电产业博览会
- 美丽健康30人论坛在沪成功举办 | 纽迈分析副总经理刘涵艺应邀出席并做主题报告!
- 新品发布|核磁共振分析仪PQ001-PRO惊艳亮相ACCSI2024
- 精彩回顾 | 福立仪器携手高校精英,共襄“第27届高校分析测试中心研究会年会暨中国分析测试协会分会年会”盛举
- 【荣誉见证】禾工科仪AKF-CAS6多工位全自动水分测定仪荣登“2023年度用户关注仪器TOP30”
- 5个步骤掌握FISH技术:高效探索微生物世界
- Ugo Basile震惊反射系统 | 精神疾病发生机制、抗精神病药物、感觉运动门控功能研究的重要实验工具
- 践行新质生产力:Chromeleon CDS简化您的工作流
- 总有机碳(TOC)分析仪在环境监测中的应用
- 荧光定量真菌毒素检测仪守护粮食安全
- 来源:内容来源于网络 浏览量:2081次
- 【导读】荧光定量PCR的应用分子生物学研究1、核酸定量分析。对传染性疾病进行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的检测,比如近期流行的甲型H1N1流感,转基因动植物基因拷贝数的检测,RNAi...
荧光定量PCR的应用
分子生物学研究
1、核酸定量分析。对传染性疾病进行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的检测,比如近期流行的甲型H1N1流感,转基因动植物基因拷贝数的检测,RNAi基因失活率的检测等。
2、基因表达差异分析。比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等),特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证
3、SNP检测。检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义,因分子信标结构的巧妙性,一旦SNP的序列信息是已知的,采用这种技术进行高通量的SNP检测将会变得简单而准确。
4、甲基化检测。甲基化同人类的许多疾病有关,特别是癌症,Laird报道了一种称作Methylight的技术,在扩增之前先处理DNA,使得未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不受影响,用特异性的引物和Taqman探针来区分甲基化和非甲基化的DNA,这种方法不仅方便而且灵敏度更高。
医学研究
1、产前诊断:人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法ZL,到目前为止,还只能只能通过产前监测,减少病婴出生,以防止各类遗传性疾病的发生,如为减少X连锁遗传病患儿的出生,从孕妇的外周血中分离胎儿DNA,用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法,易为孕妇所接受。
2、病原体检测:采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。
3、药物LX考核:对乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)定量分析显示:病毒量与某些药物的LX关系。HCV高水平表达,干扰素ZL作用不敏感,而HCV低滴度,干扰素作用敏感;在拉米夫定ZL过程中,HBV-DNA的血清含量曾有下降,随后若再度上升或超出以前水平,则提示病毒发生变异。
4、肿瘤基因检测:尽管肿瘤发病的机理尚未清楚,但相关基因发生突变是致癌性转变的根本原因已被广泛接受。癌基因的表达增加和突变,在许多肿瘤早期就可以出现。实时荧光定量PCR不但能有效地检测到基因的突变,而且可以准确检测癌基因的表达量。目前用此方法进行过端粒酶hTERT基因、慢性粒细胞性白血病WT1基因、肿瘤ER基因、前列腺癌PSM基因、肿瘤相关的病毒基因等多种基因的表达检测。
荧光定量PCR简介
荧光定量PCR检测技术诞生至今已10多年的时间,而其应用一直都没广泛展开,究其原因,无外乎受制于相关仪器、试剂和技术的发展。近期,尤其是08年以来,仪器和试剂是遍地开花,这也使科研人员均跃跃欲试,都想借此技术使自己的研究能突飞猛进,发展势头通过查找每年所发表的文章数可一目了然。据有关统计,在Medline数据库中,用“Taqman”或”realtimePCR”作为关键词检索,1996年是19篇,1999年157篇,到2003年就高达2984篇,2009年会是多少呢?我们不得而知。但其迅猛的发展势头却是不可更改的,本公司真诚希望能和众多研究人员共同努力,抓住这一大好时机,为科研事业的发展贡献自身的力量。基于这一目标,本公司长期以来对荧光定量PCR,无论是技术还是多年来的产品,均进行了深入地研究,并及时推出更加优异的荧光定量PCR技术服务。
荧光定量PCR原理
荧光定量PCRZ早称TaqManPCR,后来也叫Real-TimePCR,是美国PE(PerkinElmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据Z终的PCR产物量也不能计算出起始DNA拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段,PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量PCR技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和CT值(如下图所示)。
荧光域值(threshold)
是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值,它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上,但一般荧光域值的缺省设置是PCR反应前3-15个循环荧光信号标准偏差的10倍,即:threshold。
Ct值:是指每个反应管内的荧光信号到达设定域值时所经历的循环数。
Ct值与起始模板的关系:
研究表明,每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其中横坐标代表起始拷贝数的对数,纵坐标代表Ct值如下图所示。因此,只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
荧光定量检测
荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术(分子信标技术,以美国人Tagyi为代表)、TaqMan探针(以美国ABI公司为代表)和FRET技术(以罗氏公司为代表)等;荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料,非饱和荧光染料的典型代表就是现在Z常用的SYBRGreenⅠ;饱和荧光染料有EvaGreen、LCGreen等。
嵌合荧光染料法(SYBRGreenⅠ)
SYBRGreenI是荧光定量PCRZ常用的DNA结合染料,与双链DNA非特异性结合。在游离状态下,SYBRGreenI发出微弱的荧光,但一旦与双链DNA结合,其荧光增加1000倍。所以,一个反应发出的全部荧光信号与出线的双链DNA量呈比列,且会随扩增产物的增加而增加。
SYBRGreenI荧光染料与DNA双链的结合
双链DNA结合染料的优点:实验设计简单,仅需要2个引物,不需要设计探针,无需设计多个探针即可以快速检验多个基因,且能够进行熔点曲线分析,检验扩增反应的特异性,低的初始成本,通用性好,因此国内外在科研中使用比较普遍。
荧光探针法(Taqman技术):PCR扩增时,加入一对引物的同时再加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸,两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收,PCR仪检测不到荧光信号;PCR扩增时(在延伸阶段),Taq酶的5'-3'切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步,这也是定量的基础所在。仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
相关热词:
等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。
- 2004-11-04 09:23:10
- 标签:
- 收藏(0) 赞(0) 踩(0)
- 随时了解更多仪器资讯,求购、招标、中标信息实时更新,厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网(yiqi.com)。扫一扫关注仪器网官方微信,随时随地查看仪器用户采购、招标需求!
-
实时荧光定量PCR在甲流感诊断中的作用2004-07-28 08:59:56
摘要:病原检测方法及仪器是人感染猪流感防控的关键环节,针对实时荧光定量PCR分子诊断核酸检测技术的先进性以及
-
荧光定量PCR仪原理2004-08-07 09:10:55
实时荧光定量PCR技术[1] ,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程
-
荧光定量PCR仪与普通PCR仪的区别2004-08-09 09:15:51
荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,实时荧光定量PCR仪主要是用来
-
荧光定量PCR仪的应用2004-08-09 09:15:51
荧光定量PCR仪可用于医疗,新药研发,诊断检验试剂研发等领域。 在医疗方面,具体可用于病原体检测;产前诊断以
-
荧光定量快速检测系统的优势特点2004-08-14 09:23:04
荧光定量快速检测系统检测原理:一卡一控,运用高精度的荧光免疫分析仪读取快速定量检测卡,对比检测区、质控区与背
-
实时荧光定量 PCR 引物设计原则2004-09-11 09:23:04
实时荧光定量PCR(real-timePCR)技术和普通PCR相比,准确性和灵敏度高,速度快,效率高,近年来
-
实时荧光定量PCR仪简介及技术原理2004-09-14 09:23:04
实时荧光定量PCR仪适用于临床及科研以聚合酶链式反应为特征的、以实时荧光定量检测分析DNA/RNA为目的的病
-
荧光定量PCR仪原理 荧光定量PCR仪技术原理 Ct 值 荧光化学物质2004-09-14 09:23:04
荧光定量PCR仪技术原理将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸
-
荧光定量PCR仪与普通PCR仪的区别是什么?2004-09-14 09:23:04
荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,实时荧光定量PCR仪主要是用来
-
荧光定量PCR具体使用操作 折叠 样品RNA的抽提 折叠 RNA质量检测 折2004-09-14 09:23:04
操作步骤荧光定量PCR实验步骤:折叠样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。②两相
荧光定量PCR:简介、原理、应用
-
您可能感兴趣
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi