植物乙酰辅酶A 羧化酶（ACC）elisa检测试剂盒说明书

植物乙酰辅酶A羧化酶（ACC）酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及相
关液体样本中乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的活性。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物乙酰辅酶A羧化酶（ACC）水平。用纯化的
植物乙酰辅酶A羧化酶（ACC）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依
次加入乙酰辅酶A羧化酶（ACC），再与HRP标记的乙酰辅酶A羧化酶（ACC）抗体结合，
形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催
化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的乙酰辅酶A
羧化酶（ACC）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线
计算样品中植物乙酰辅酶A羧化酶（ACC）活性。
试剂盒组成：
试剂盒组成48孔配置96孔配置保存
说明书1份1份
封板膜2片（48）2片（96）
密封袋1个1个
酶标包被板1×481×962-8℃保存
标准品：2700U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存
标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存
酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存
样本处理及要求：
1.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞
浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分
钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器
将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待
检测，其余冷冻备用。
3.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
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进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
4.不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在diyi、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在diyi、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从diyi孔、第二
孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，
浓度分别为1800U/L，1200U/L，600U/L，300U/L，150U/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样
品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混
匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间Z好
控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，Z好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值
大于标准品孔diyi孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计
算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
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10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批见应分别小于9%和15%
检测范围：
40U/L-2200U/L
保存条件及有效期：
1．试剂盒保存：2-8℃。
2．有效期：6个月

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