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ELISA测定中可能会出现的问题及解决方法

来源:内容来源于网络 浏览量:477次
【导读】问题可能的原因解决方法1.非常弱的结果(1)温育的时间或温度不够;校正温育箱温度;校正定时钟准(2)显色反应时间太短;确定时;使用新鲜合格的蒸馏水;(3)所用配制缓冲液的蒸馏水有问...

问题

可能的原因

解决方法

1.非常弱的结果

(1)温育的时间或温度不够;

校正温育箱温度;校正定时钟准

(2)显色反应时间太短;

确定时;使用新鲜合格的蒸馏水;

(3)所用配制缓冲液的蒸馏水有问题;

按照说明书保存试剂盒和准确配

(4)加入抗体/酶的稀释液浓度太低;

制工作液;试剂室温平衡至少20

(5)酶标仪滤光片不正确;

分钟,确保所有试剂已平衡至室

(6)不正确的试剂储存方式;

温(约25℃);校正移液器,吸

(7)试剂盒没有充分平衡;

嘴要配套,装吸嘴时要紧密,吸

(8)移液器吸液量不足,吸嘴内壁挂

水太多或内壁不清洁。

嘴内壁要清洁,最好一次性使用。

2.标准曲线和测定的重复性差

这是典型的由测定操作引起的问题,包括

重复某一样品时,加样时间尽可

(1)加样本及试剂量不准;孔间不一致;

能与第一次接近;重复测定标本,

(2)加样过快,孔间发生污染;

操作条件、人员等应尽可能与上

(3)加错样本;

次保持一致,以排除这些因素造

(4)加样本及试剂时,加在孔壁上部非

包被区;

成的不一致的可能性;样品稀释

(5)不同批号试剂盒中组分混用;

(6)温育时间、洗板、显色时间不一致;

前应充分混匀;尽可能使用同一

(7)孔内污染杂物;

移液器并装紧吸嘴。

(8)酶标仪滤光片不正确;

(9)试剂/样品没有混匀;

(10)血清标本未完全凝固即加入,

反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留

血细胞,易出现假阳性反应等。

3.白板(阳性对照不显色)

(1)漏加酶结合物;

请按说明书所示稀释倍数配制;

(2)洗板液配制中出现问题,

如量筒不干净,含酶抑制物(如叠

氮钠)等;

注意不要漏加;每次加液前均应

(3)添加的试剂错误或者被遗漏;

核对标签。

(4)试剂过期;

4.空白背景高

(1)洗板不干净;

浓缩洗液准确配制;50倍浓缩洗

(2)显色液变质;

涤液如有结晶则应让结晶于室温

(3)试剂过期;

全部溶解后再量取稀释;充分洗

(4)不正确的试剂稀释液,如加酶的

浓度过高;

涤,彻底拍干;加样或加酶拍板

(5)蒸馏水受酶等污染;

的滤纸应弃去不用,不要反复使

(6)试剂混用;

用,否则易造成污染;吸嘴尽可能一次性使用;使用新鲜蒸馏水;不同批号试剂勿混用;请按说明书所示稀释倍数配制;显色反应时间适当缩短。

(7)培养箱温度超过37℃或反应时

间过长。


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2019-02-28 09:23:04
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